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十月
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(1) 显微镜的取用
一手握镜臂,一手托住镜座,将显微镜轻轻放置在桌上,距桌缘约一个姆指距离之处.
调整坐椅至适当高度,使自己可以轻松地使用显微镜.
取 95% 酒精及拭镜纸,将所有镜头擦拭干净(※注意:仅能以单一直线方向擦拭).
将玻片标本平稳地放在载物台上,以玻片夹夹好(※注意:请确认是否夹好,以免玻片跳起,造成同学受伤或损及显微镜镜头).
(2) 低倍镜的使用
先将载物台降至最低点,转动旋转盘( Revolving nosepiece ),使低倍镜位于镜筒正下方.
打开光源,调整光源调整钮及光圈( Iris diaphragm ),使视野中之亮度适当.
将所要观察的玻片放在载物台上,以玻片夹夹好,并转动调节钮 ( mechanical stage control knobs ) 以调整玻片位置.转动调节轮 ( Adjustment knob ),至低倍镜与载物台相距约 0.1 cm(或载物台无法再上升)为止.
由接目镜观察,同时以靠向自己的方向缓缓转动调节轮( Adjustment knob ),使载物台下降,直到影像清晰为止.若视野太亮或太暗,皆可调整光源调整钮及光圈( Iris diaphragm ) ,使视野中之亮度适当.
(3) 高倍镜的使用
先使用低倍镜找到欲观察的目标,将该部位调整至视野中央.
重覆 “低倍镜的使用” 方法之A.~D..
(4) 油镜的使用
先使用高倍镜找到欲观察的目标,将该部位调整至视野中央.
将高倍镜转开,加一小滴油镜专用油( immersion oil ) 于所见物像范围的玻片上(即光线照亮的区域),换用100倍接物镜(即 oil immersion objective),小心将油镜浸于油中,重新调整光圈,并缓慢转动调节轮( Adjustment knob ),直到影像清晰为止.
(5) 注意事项
严忌单手提取显微镜.
若须移动显微镜,务必将显微镜提起再放至适当位置,严忌推动显微镜(推动时造成的震动可能会导致显微镜内部零件的松动,切记!!),使用显微镜请务必小心轻放.
使用显微镜时坐椅的高度应适当,观察时更应习惯两眼同时观察,且光圈及光源亮度皆应适当,否则长时间观察时极易感觉疲劳.
转动旋转盘时务必将载物台降至最低点,以免因操作不当而刮伤接目镜之镜头.
标本染色或其他任何操作皆应将玻片取下,操作完成后再放回载物台观察,切勿在载物台上操作,以免染剂或其他液体流入显微镜内部或伤及镜头.
观察完一种材料,欲更换另一种材料时,务必将载物台下降至最低点,换好玻片后再依标准程序重新对焦,切勿直接抽换标本,以免刮伤镜头或玻片标本.
显微镜使用前后皆应以拭镜纸 ( Lens paper ) 及 95% Alcohol清洁所有镜头,擦拭时应沿单一直线方向轻拭,不可旋转磨擦.
擦拭显微镜镜头时只能用拭镜纸 ( Lens paper ),切勿用其他纸张或手指接触镜头.
用毕显微镜应将载物台下降至最低点,并将低倍镜对准载物台中央圆孔处,将电源线卷好,盖上防尘罩,并收入存放柜中.
若长期不使用,应以 Xylene ( Xylol ) 清洁所有镜头.
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11
十月
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人的肉眼由于先天的限制,在25 cm的明视距离下,只能分辨相距 0.2 mm 以上的两点(即解析力 ( resolving power ) 为 0.2 mm),对于更微小的物体,就必须借助于显微镜。无论是何种显微镜,其主要功能都在于将影像放大 ( magnification ),并增加影像的明暗对比 ( contrast )。
显微镜种类繁多,依其呈像原理大致可以分为光学显微镜和电子显微镜两大类。两者差异如下表所示:
Table 2-4. A 光学显微镜与电子显微镜对比
Light ( Compound )
|
Electron ( Transmission )
|
|
Lenses
|
玻璃 |
电磁铁 |
Illumination
|
包含多种波长的可见光 |
单一波长的电子束 |
Resolving power
|
0.2 mm |
1nm=0.001mm |
Magnifies
|
2,000 |
100,000 |
Costs
|
数千美元 |
数十万美元 |
Specimen
|
活的或死的皆可 |
必须为死的 |
增加光学显微镜影像的明暗对比的方法很多,例如利用染色法处理样本,或在显微镜上附加特殊装置(例如位相差显微镜 、暗视野显微镜 、干涉显微镜 、偏光显微镜、X光显微镜、萤光显微镜 、紫外光显微镜等)。
本学年同学将使用到的显微镜有双目镜复式光学显微镜 及双目镜解剖显微镜两种,以下将分别介绍其各部位的名称及功能。
(1) 双目镜复式光学显微镜
接目镜 :放大倍率为 10,可因应各人的双眼距离来调整,内安装有目镜测微尺,有些另装有指针,装有目镜测微尺的接目镜上有调节轮,可因应各人焦距来调整。
镜筒 :介于接目镜与接物镜之间。
旋转盘 :接于镜筒下方,通常有四个接孔,可接不同倍数的接物镜,本身可以旋转藉以更换不同倍数的接物镜。
接物镜:有scanning power objective ( 3.2)、low power objective ( 10)、high power objective ( 40)、oil immersion objective ( 100) 四种。
载物台:为放置标本玻片的平台,中央有一圆孔,可供光线通过。我们所使用的载物台为机械式载物台 ,上面有玻片夹及调节钮 ( mechanical stage control knobs ),可固定玻片及调整玻片位置。
集光器 ( Condenser ):位于载物台下方中央,由许多透镜组合而成,用以集合光线,使之投射于标本上。
光圈(虹膜) ( Iris diaphragm ):连接于集光器下方,上有一支调整柄 ( aperture diaphragm control ),可用以调整光圈孔径大小,以调整投射于标本上之光线强弱。
照明器 ( Illuminator ):位于镜座上,内设光源为钨丝灯,直接提供观察所需之光源。
镜臂 ( Arm ):连接镜筒及镜座,并供握取显微镜。
调节轮( Adjustment knob ):位于镜柱两侧,可调整载物台的升降,以供对焦。依顺时钟方向(远离自己身体方向)旋转,则载物台上升,反之则下降(*注意:此方向有时依机型厂牌不同而异,也有调节轮是调节镜筒之升降者,首次使用时可先缓慢旋转试试看即可确定)。
镜座 ( Base ):显微镜之最底部。其右侧有光源调整钮,可调整照明器内光源亮度;后方接有电源线,有时尚有光源开关。
(2) 双目镜解剖显微镜 (Binocular dissecting microscope) (Stereomicroscope)
接目镜( Eyepiece ):放大倍率为 8( M1A 机型)或10( M3 机型 ),有些的接目镜上有调节轮( M3 机型 ),可因应各人焦距来调整。
镜筒 ( Body tube ):介于接目镜与接物镜之间。
接物镜( Objective ):M1A 机型只有1一种;M3 机型则有6.4、10、40三种,镜筒两侧有切换钮,可切换三种不同倍数的物镜。
调节轮( focusing knob ):位于镜柱两侧,可调整接物镜的升降,以供对焦。依顺时钟方向(远离自己身体方向)旋转,则接物镜上升,反之则下降。
镜柱( Pillar ):连接镜筒及镜座,并供握取显微镜。
照明器 ( Illuminator ):位于镜座上,内设光源为钨丝灯,直接提供观察所需之光源(※注意:由于此光源为热光源,使用时会发热,应避免直接接触照明器,以免烫伤),开关在电源线上。
镜座 ( Base ):显微镜之最底部。其上有载物台,为一圆盘,有黑白两色,可依需要自行变换。
»11
十月
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各公制单位的名称及代表意义如下表所示:
Table 2-1. Metric Unit Values & Conversion(长度单位)
Unit
|
Symbol
|
Value (decimal)
|
Value (fractional)
|
Value (exponent)
|
Relative Size
|
Kilometer |
km |
1,000m | 1,000m |
103m |
largest |
Meter |
m |
1.0m | 1.0m |
100m |
|
Centimeter |
cm |
0.01m | 1/100m |
10-2m |
|
Millimeter |
mm |
0.001m | 1/1,000m |
10-3m |
|
Micrometer |
mm |
0.000001m | 1/1,000,000m |
10-6m |
|
Nanometer |
nm |
0.000000001m | 1/1,000,000,000m |
10-9m |
smallest |
Table 2-2. Metric Unit Values & Conversion(重量单位)
Unit
|
Symbol
|
Value (decimal)
|
Value (fractional)
|
Value (exponent)
|
Relative Size
|
Kilogram |
kg |
1,000g | 1,000g |
103g |
largest |
Gram |
g |
1.0g | 1.0g |
100g |
|
Milligram |
mg |
0.001g | 1/1,000g |
10-3g |
|
Microgram |
mg |
0.000001g | 1/1,000,000g |
10-6g |
|
Nanogram |
ng |
0.000000001g | 1/1,000,000,000g |
10-9g |
smallest |
Table 2-3. Metric Unit Values & Conversion(体积单位)
Unit
|
Symbol
|
Value (decimal)
|
Value (fractional)
|
Value (exponent)
|
Relative Size
|
Liter |
L |
1.0L | 1.0L |
100L |
largest |
Milliliter |
mL |
0.001L | 1/1,000L |
10-3L |
|
Microliter |
mL |
0.000001L | 1/1,000,000L |
10-6L |
smallest |
同学必须熟练各单位之间的转换,例如:
3.5 cm = 3.5 10-2 m
= 3.5 10-2 106 m m = 3.5 104 m m
转换单位之目的在于避免使用极大或极小之数字。
»10
十月
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显微镜观察
微生物顾名思义,就是十分微小的生命体。以人类肉眼是很难看见微生物的外观,更何况是研究其外部型态以及内部构造。因此在微生物学中,使用显微镜的观察十分重要。除了观看微生物的外观之外,许多的测试以及化学作用的呈色结果,都需要依靠显微镜的观察。
学习目标:于本次实验结束后你应该知道
各公制单位之名称、代表数值及各单位间的转换
复式光学显微镜 各部位的名称及功能
解剖显微镜各部位的名称及功能
比较复式光学显微镜及电子显微镜 之间的差异
字母e经过复式光学显微镜转换后之影像
如何计算视野直径及各镜头下之放大倍率
如何计算镜头下各细胞及标本之实际大小
依序写出使用复式光学显微镜观察之步骤
光学显微镜镜头的保养方法
油镜的使用方法及使用之后如何去除镜头及玻片上的油
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07
十月
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普动实验第一堂课的内容是「复合显微镜的使用和维护」。虽然学生在国高中阶段几乎都用过显微镜,但是显微镜的使用方式还是得从头好好教一次。
课堂流程重点:
上课前先开显微镜箱的锁(之后上组织课程时亦然,请值日生先把所有柜子打开,节省上课中的移动、开锁时间)
显微镜课程开始前,让学生先拿出显微镜。
注意:
(1)桌面净空;
(2)用双手拿显微镜:一手拿镜臂,一手托底座;
(3)小心轻放,严禁於桌面拖行;
(4)防尘套与眼罩放回显微镜箱中;
(5)只能碰触有烤漆和有刻纹的地方;
(6)先不要插上电源
讲解顺序、内容。对照部位讲解功能原理,先讲课再逐步操作。
讲光圈时谈景深
NA(照孔数值):直接看显微镜镜头上的数值,Lens 长度(改变入射角)
tube length
操作:step by step。
补充教材:
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