上海光学仪器厂

显微镜教学四 复式光学显微镜的使用方法

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(1) 显微镜的取用

一手握镜臂,一手托住镜座,将显微镜轻轻放置在桌上,距桌缘约一个姆指距离之处.

调整坐椅至适当高度,使自己可以轻松地使用显微镜.

取 95% 酒精及拭镜纸,将所有镜头擦拭干净(※注意:仅能以单一直线方向擦拭).

将玻片标本平稳地放在载物台上,以玻片夹夹好(※注意:请确认是否夹好,以免玻片跳起,造成同学受伤或损及显微镜镜头).

(2) 低倍镜的使用

先将载物台降至最低点,转动旋转盘( Revolving nosepiece ),使低倍镜位于镜筒正下方.

打开光源,调整光源调整钮及光圈( Iris diaphragm ),使视野中之亮度适当.

将所要观察的玻片放在载物台上,以玻片夹夹好,并转动调节钮 ( mechanical stage control knobs ) 以调整玻片位置.转动调节轮 ( Adjustment knob ),至低倍镜与载物台相距约 0.1 cm(或载物台无法再上升)为止.

由接目镜观察,同时以靠向自己的方向缓缓转动调节轮( Adjustment knob ),使载物台下降,直到影像清晰为止.若视野太亮或太暗,皆可调整光源调整钮及光圈( Iris diaphragm ) ,使视野中之亮度适当.

(3) 高倍镜的使用

先使用低倍镜找到欲观察的目标,将该部位调整至视野中央.

重覆 “低倍镜的使用” 方法之A.~D..

(4) 油镜的使用

先使用高倍镜找到欲观察的目标,将该部位调整至视野中央.

将高倍镜转开,加一小滴油镜专用油( immersion oil ) 于所见物像范围的玻片上(即光线照亮的区域),换用100倍接物镜(即 oil immersion objective),小心将油镜浸于油中,重新调整光圈,并缓慢转动调节轮( Adjustment knob ),直到影像清晰为止.

(5) 注意事项

严忌单手提取显微镜.

若须移动显微镜,务必将显微镜提起再放至适当位置,严忌推动显微镜(推动时造成的震动可能会导致显微镜内部零件的松动,切记!!),使用显微镜请务必小心轻放.

使用显微镜时坐椅的高度应适当,观察时更应习惯两眼同时观察,且光圈及光源亮度皆应适当,否则长时间观察时极易感觉疲劳.

转动旋转盘时务必将载物台降至最低点,以免因操作不当而刮伤接目镜之镜头.

标本染色或其他任何操作皆应将玻片取下,操作完成后再放回载物台观察,切勿在载物台上操作,以免染剂或其他液体流入显微镜内部或伤及镜头.

观察完一种材料,欲更换另一种材料时,务必将载物台下降至最低点,换好玻片后再依标准程序重新对焦,切勿直接抽换标本,以免刮伤镜头或玻片标本.

显微镜使用前后皆应以拭镜纸 ( Lens paper ) 及 95% Alcohol清洁所有镜头,擦拭时应沿单一直线方向轻拭,不可旋转磨擦.

擦拭显微镜镜头时只能用拭镜纸 ( Lens paper ),切勿用其他纸张或手指接触镜头.

用毕显微镜应将载物台下降至最低点,并将低倍镜对准载物台中央圆孔处,将电源线卷好,盖上防尘罩,并收入存放柜中.

若长期不使用,应以 Xylene ( Xylol ) 清洁所有镜头.

显微镜教学三 显微镜简述

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人的肉眼由于先天的限制,在25 cm的明视距离下,只能分辨相距 0.2 mm 以上的两点（即解析力 ( resolving power ) 为 0.2 mm）,对于更微小的物体,就必须借助于显微镜。无论是何种显微镜,其主要功能都在于将影像放大 ( magnification ),并增加影像的明暗对比 ( contrast )。

显微镜种类繁多,依其呈像原理大致可以分为光学显微镜和电子显微镜两大类。两者差异如下表所示:

Table 2-4. A 光学显微镜与电子显微镜对比

增加光学显微镜影像的明暗对比的方法很多,例如利用染色法处理样本,或在显微镜上附加特殊装置（例如位相差显微镜 、暗视野显微镜 、干涉显微镜 、偏光显微镜、X光显微镜、萤光显微镜 、紫外光显微镜等）。

本学年同学将使用到的显微镜有双目镜复式光学显微镜 及双目镜解剖显微镜两种,以下将分别介绍其各部位的名称及功能。

(1) 双目镜复式光学显微镜

接目镜 :放大倍率为 10,可因应各人的双眼距离来调整,内安装有目镜测微尺,有些另装有指针,装有目镜测微尺的接目镜上有调节轮,可因应各人焦距来调整。

镜筒 :介于接目镜与接物镜之间。

旋转盘 :接于镜筒下方,通常有四个接孔,可接不同倍数的接物镜,本身可以旋转藉以更换不同倍数的接物镜。

接物镜:有scanning power objective ( 3.2)、low power objective ( 10)、high power objective ( 40)、oil immersion objective ( 100) 四种。

载物台:为放置标本玻片的平台,中央有一圆孔,可供光线通过。我们所使用的载物台为机械式载物台 ,上面有玻片夹及调节钮 ( mechanical stage control knobs ),可固定玻片及调整玻片位置。

集光器 ( Condenser ):位于载物台下方中央,由许多透镜组合而成,用以集合光线,使之投射于标本上。

光圈(虹膜) ( Iris diaphragm ):连接于集光器下方,上有一支调整柄 ( aperture diaphragm control ),可用以调整光圈孔径大小,以调整投射于标本上之光线强弱。

照明器 ( Illuminator ):位于镜座上,内设光源为钨丝灯,直接提供观察所需之光源。

镜臂 ( Arm ):连接镜筒及镜座,并供握取显微镜。

调节轮( Adjustment knob ):位于镜柱两侧,可调整载物台的升降,以供对焦。依顺时钟方向（远离自己身体方向）旋转,则载物台上升,反之则下降（＊注意:此方向有时依机型厂牌不同而异,也有调节轮是调节镜筒之升降者,首次使用时可先缓慢旋转试试看即可确定）。

镜座 ( Base ):显微镜之最底部。其右侧有光源调整钮,可调整照明器内光源亮度;后方接有电源线,有时尚有光源开关。

(2) 双目镜解剖显微镜 (Binocular dissecting microscope) (Stereomicroscope)

接目镜( Eyepiece ):放大倍率为 8( M1A 机型)或10( M3 机型 ),有些的接目镜上有调节轮( M3 机型 ),可因应各人焦距来调整。

镜筒 ( Body tube ):介于接目镜与接物镜之间。

接物镜( Objective ):M1A 机型只有1一种;M3 机型则有6.4、10、40三种,镜筒两侧有切换钮,可切换三种不同倍数的物镜。

调节轮( focusing knob ):位于镜柱两侧,可调整接物镜的升降,以供对焦。依顺时钟方向（远离自己身体方向）旋转,则接物镜上升,反之则下降。

镜柱( Pillar ):连接镜筒及镜座,并供握取显微镜。

照明器 ( Illuminator ):位于镜座上,内设光源为钨丝灯,直接提供观察所需之光源（※注意:由于此光源为热光源,使用时会发热,应避免直接接触照明器,以免烫伤）,开关在电源线上。

镜座 ( Base ):显微镜之最底部。其上有载物台,为一圆盘,有黑白两色,可依需要自行变换。

显微镜教学二 公制单位 —– 采十进位法

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各公制单位的名称及代表意义如下表所示：

Table 2-1. Metric Unit Values & Conversion（长度单位）

Table 2-2. Metric Unit Values & Conversion（重量单位）

Table 2-3. Metric Unit Values & Conversion（体积单位）

同学必须熟练各单位之间的转换,例如:

3.5 cm = 3.5 10-2 m

= 3.5 10-2 106 m m = 3.5 104 m m

转换单位之目的在于避免使用极大或极小之数字。

显微镜教学一

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显微镜观察

微生物顾名思义，就是十分微小的生命体。以人类肉眼是很难看见微生物的外观，更何况是研究其外部型态以及内部构造。因此在微生物学中，使用显微镜的观察十分重要。除了观看微生物的外观之外，许多的测试以及化学作用的呈色结果，都需要依靠显微镜的观察。

学习目标：于本次实验结束后你应该知道

各公制单位之名称、代表数值及各单位间的转换

复式光学显微镜 各部位的名称及功能

解剖显微镜各部位的名称及功能

比较复式光学显微镜及电子显微镜 之间的差异

字母e经过复式光学显微镜转换后之影像

如何计算视野直径及各镜头下之放大倍率

如何计算镜头下各细胞及标本之实际大小

依序写出使用复式光学显微镜观察之步骤

光学显微镜镜头的保养方法

油镜的使用方法及使用之后如何去除镜头及玻片上的油

显微镜的种类及特点

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光学显微镜的认识人的肉眼像一个透镜,可看到物体的原大小,我们称为1倍,或写做1x;一个普通的镜片若可将物体放大为肉眼可见的5倍大,表示此镜片的放大倍数为5,或写做5x.此种镜片被称为简单型显微镜(simp1e microscope)亦即我们日常所称的放大镜.

若结合两片或两片以上的镜片,可增加放大的效率(power of magnification),复式显微镜(compound microscope)即是将一序列的镜片组合起来而制成的;因为它是利用可见光来产生影像,因此又被称为光学显微镜(1ight microscope),我们常用的「显微镜」(microscope)一词即是指复式显微镜或光学显微镜(后者较常被使用),.一个光学显微镜若由2片5x的镜片组合,则其放大倍率为25x(5x*5x=25x).近代的光学显微镜可将镜片随意组合,最大可放大至1000x.

除了放大倍率外,解像力(reso1ving power、或resolution)和对比(contrast)亦会影响影像的清晰度.解像力是指分辨两点最短的距离;例如人类的肉眼在25cm的明视距离下,解像力为200um(=0.2mm),意即当两个小点的距离近到小于200um时,肉眼即无法辨认清楚,此时即须借重放大镜或显微镜.最好的光学显

微镜之解像力为0.2mm,约为人眼的1000倍.若显微镜放大倍率超过1000倍,我们其实只看到模糊的放大影像,并未观察到更微小的构造,所以超过1000倍以上的倍率称为无效放大倍率(empty magnification)

由课本第一章图1-6中,可知生物体大小的比例,也知光学显微镜可用来观察一般的细胞或较大的胞器.兹列举数种常用的光学显微镜,它们可用不同的方法来增加影像的清晰度,其方法有:

明视野(brightfie1d)一一光学显微镜的标准配备,通常用来观察新鲜或活的标本.光线直接穿透过标本而呈像,但不易看到详细构造,若将标本用不同的染剂染色,可增加对比而使影像更清晰.

暗视野(dark field)一一光线经由某一个角度才穿透过标本,因此只能看到散布的光点.

相位差(phase-contrast)一一将标本中不同的密度放大以增强对比,此法常用在活细胞、未染色的细胞或无色素的细胞,例如观察藻类的鞭毛.

干涉(differentia1-interference一contrast,或称Nomarski)–增强标本内密度的差异性.课本中硅藻(图2一I一2)或鸭织草的下表皮(图2一10),即是以此法拍得.

其他另有共轭焦显微镜及立体显微镜.

共轭焦显微镜(confoca1microscope)–利用雷射和特殊的光学做「光学切片」(optica1sediorling),可将欲观察之物体如同切片一般,一层一层的观察和摄影,只有在所选择的很窄的平面焦距深度才有影像,在它的上方或下方皆现出黑色或模糊的景象;将这些结果合并,即为此物体的立体构造.此法可省去切片的工作.

立体显微镜(stereomicroscope)一一它具有内建式的两部显微镜的光学系统,每一个系统由不同的角度以反射光观察不透明的标本,此种显微镜一定要有双筒的目镜,因此所观察的物体可产生三度空间的立体影像.此显微镜亦可用来解剖微小的生物标本,工业上则可用来组合零件,因此又被称为解剖显微镜 (dissecting microscope).

光学显微镜是利用可见光来产生影像,最高解像力也只能为0.2mm,无法满足人类继续探讨生物构造的欲望.1932年,Busch和 Ruska 发明了第一部穿透式子电子显微镜(Transmission e1ectron microscope,简称TEM);标本需做固定、

脱水、包埋、超薄切片和染色等步骤,在TEM下可观察标本内部的超微细构造.

1938年,van Ardenne发明了第一部扫描式电子显微镜(Scanning e1ectronmicroscope,简称SEM,标本需做固定、脱水、临界点干燥和金属离子覆膜等步骤,在SEM下可观察标本表面的微细构造.电子显微镜是以电子束取代光束,它的波长更短,因此解像力亦增加了,可达到0.4nm的解像力,此几乎为光学显微镜的1000倍.

显微镜的种类—切片显微镜

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切片显微镜：也就是一般在学校中所使用的显微镜，因為使用这种显微镜一定要将样本切片之后来观察，而不能直接放到显微镜底下去做实验，和一般宝石用或解剖用的显微镜有很大的区别。

原理：切片显微镜镜头都是採用凸透镜来製造，所以能有放大功能；另一方面，所接受的光源是採取穿透式光源，让光穿过薄薄的切片后进行观察。

各部位功能说明：

目镜、物镜：显微镜中靠近眼睛的镜头，通常目镜愈长的倍率愈小；而对物镜来说，正好和目镜的特点都相反，目镜愈长，所得的倍率愈大；要如何的计算显微镜的倍率呢？将目镜和物镜上的倍率数目相乘，所得的乘积，就是放大倍率。

调节轮：调整焦距的主要构造，现今的设备都将粗调节轮与细调节轮製作成同轴调节论，外轮為粗轮，内轮為细轮。

微距调整器：能够平顺缓慢的移动玻片，帮助追踪样本。

光源：替代阳光的光线，能够在任何时间进行观察。

物镜旋转盘：更换接物镜的镜筒以对準样本。

照相机接头：能够添加照相机或是摄影机的特别构造。

显微镜课程大纲笔记

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普动实验第一堂课的内容是「复合显微镜的使用和维护」。虽然学生在国高中阶段几乎都用过显微镜，但是显微镜的使用方式还是得从头好好教一次。

课堂流程重点：

上课前先开显微镜箱的锁（之后上组织课程时亦然，请值日生先把所有柜子打开，节省上课中的移动、开锁时间）

显微镜课程开始前，让学生先拿出显微镜。

注意：

(1)桌面净空；

(2)用双手拿显微镜：一手拿镜臂，一手托底座；

(3)小心轻放，严禁於桌面拖行；

(4)防尘套与眼罩放回显微镜箱中；

(5)只能碰触有烤漆和有刻纹的地方；

(6)先不要插上电源

讲解顺序、内容。对照部位讲解功能原理，先讲课再逐步操作。

讲光圈时谈景深

NA（照孔数值）：直接看显微镜镜头上的数值，Lens 长度（改变入射角）

tube length

操作：step by step。

补充教材：

复式显微镜应用的镜头和光放大图像

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复式显微镜使用的镜头和光放大图像，也被称为光学或光镜（与/电子显微镜）。最简略的光学显微镜，放大镜，是良好的十倍左右（10倍）的放大倍率。化合物显微镜具有更大的放大倍率，1）眼，或目镜，和2）客观的镜头或镜头最接近的对象，在购置或使用显微镜，它是非常主要的一成两个体系的镜头知道每个部分的功效​​。他们通常

目镜：在顶部的镜头，你看通过

管10X或15X电源：衔接目镜物镜

臂：​​支撑管，并把它衔接到基地

基地：显微镜的底部，用于支撑

照明：一个稳固的光源（110伏），在镜子的处所使用。如果您的显微镜有一面镜子，它是用来反应外部光源的光线通过阶段底部。

舞台。平坦的平台，在这里您将您的幻灯片舞台剪辑举办到位的幻灯片，如果您的显微镜有一个机械的阶段，您将能够通过转动两个旋钮移动四处滑动。一个动作，左，右，其他移动向上和向下

循环水枪或炮塔：这是一部分，拥有两个或两个以上的物镜，可旋转轻易转变的力气。

架停滞：这是调整，决议如何封闭物镜可以得到的幻灯片。它是在出厂时设置，并坚持起动的高功率物镜成幻灯片和摔显微镜的学生，你只须要调剂这个假如你应用非常薄的幻灯片，你不能够专注于在高功率的标本。 （提醒：假如您应用的是薄的幻灯片，并不能集中，而不是调剂机架结束，原幻灯片置于一个透明玻璃的幻灯片，以进步它高一点）

聚光镜：聚光镜的目标是集中到标本。冷凝器镜头是最有用的最高权利（400X及以上）在舞台聚光镜片显微镜浮现比那些没有镜头清楚的图像（ 400X）如果您的显微镜400X的最大功率，你会得到额定为0.65 NA或0.65 NA聚光镜片可安装在舞台上应用的是冷凝器镜头的最大效益，工作得非常好。镜头安装到一个阶段的一大上风是，有少了一个重点项目来处置。，假如你往1000X，那么你应当有一个大于或即是1.25的NA大多数1000X显微镜一个可聚焦聚光透镜。使用1.25阿贝聚光镜体系。阿贝聚光镜，可以向上和向下移动，这是一套非常接近1000X幻灯片，并在较低的权利较远。

隔膜或虹膜：很多显微镜下阶段的旋转盘，这种膜片有不同大小的孔，是用来转变的强度和大小的光锥，预计到幻灯片向上。是没有设置规矩设置使用一个特定的权利，而是设置一个试样的透明度功效，对照度你的欲望，并在使用特定的物镜。

如何关注您的显微镜：恰当的方法聚焦显微镜开端与第一功耗最低的物镜，而从侧面看，曲柄不接触的镜头尽可能接近试样。现在，通过目镜看，向上集中，直到图像清晰，如果你不能得到它的焦点，再次反复这个进程一旦图像清楚，低功耗的镜头。你应当能够简略地点击在未来的电力镜头和聚焦旋钮做稍微的调整，如果您的显微镜有着精良的重点调剂，将其位应所有的必要持续随后的目的镜头和每次罚款焦点。

购置一台显微镜时，寻找什么。如果你想有一个真正的显微镜，供给锋利清楚的图像，然后从玩具商厂，声称往600X或以上的塑料文书阔别。市场上很多高品德的学生级显微镜今天

。他们有一个金属车身和全玻璃镜片，最主要的斟酌因素之一，是从一个有信用的起源购置仪器的的，固然经销商可能会给你一个巨大的价钱，他们可能不会在明年辅助你有一个问题。显微镜世界的经销商，我们可以强烈建议之一是，他们供给了一个极具竞争力的价钱各种各样的仪器。

显微镜 – 零件，历史，功效，类型多！

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显微镜

你从未觉得迷惑显微镜术语，或对很多不同种类的显微镜？他们可以做什么和如何应用它们？你已经来到了准确的处所。在显微镜的辅助，我们的目的是供给一个简略，明白地懂得这个巧妙的工具。在这里，您将懂得显微镜的历史，仪器的组成部分，也扼要描写很多不同种类的显微镜。

我们说明，如复合，立体声，紫外，荧光和共聚焦光学显微镜，电子显微镜，如传输（ TEM ），扫描（SEM）和扫描透射（STEM）的。电子探针仪器，如EDS和WDS 。最后，有一个相当新的仪器品种，在扫描探针显微镜，其中的原子力显微镜（AFM）是日常工作最有用的。这些显微镜采取了细尖探针 – 提醒可能在某些情形下，单个原子 – 扫描在试样表面非常接近。其中之一，扫描隧道显微镜（STM） ，可以使一个标本显示具体到单个原子表面的舆图。

你盼望购置一台显微镜？假如是的话，我们建议摸索频道商厂购物。按：

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