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人工显微镜检查的重要性

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人工显微镜检查的重要性
血细胞按所属系列分六大系统，即红细胞系、粒细胞系、单核细胞系、淋巴细胞系、浆细胞系和巨核细胞系。红细胞系可分为原红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞、网织红细胞、成熟红细胞六个阶段。有核红细胞实际上是未成熟的红细胞。正常人血片中不会出现有核红细胞，成人外周血中出现有核红细胞均属病理现象。可见于：①增生性贫血：最常见于各种溶血性贫血、急性失血性贫血、巨幼红细胞性贫血、严重的低色素性贫血。以出现晚幼红细胞或中幼红细胞为多见。外周血中出现有核红细胞表示骨髓中红细胞系增生明显活跃；②红血病、红白血病：骨髓中幼稚红细胞异常增生并释放入血，以原红细胞、早幼红细胞为多见；③髓外造血：骨髓纤维化时，脾、肝、淋巴结等组织恢复胚胎时期的造血功能，这些组织因缺乏对血细胞释放的调控能力，幼稚血细胞大量进入外周血。各发育阶段的幼红细胞都可见到，并可见到幼稚粒细胞及巨核细胞；④其他：如骨髓转移癌、严重缺氧等。
患者王某某，性别男，年龄24岁，因主诉高热、畏寒3天，头痛2天于2012年2月17日入院。既往个人史：5岁左右诊断为“地中海贫血”，行脾切除术，14岁左右行扁桃体切除术。入院以来，共查过4次血常规。

该患者诊断为地中海贫血，镜下可见较多晚幼红细胞和中幼红细胞。白细胞分类计数时，需通过白细胞校正值公式对白细胞进行校正。白细胞校正值公式(Y为100个白细胞中有核红细胞的数量)：白细胞的校正值＝100×校正前白细胞数／(100+Y)
血细胞分析仪对该患者标本进行分析时，错把有核红细胞当作淋巴细胞，使白细胞假性增高，如果没对白细胞进行校正，可能会对临床造成误诊。通过上述1例特殊病例分析, 在进行自动血细胞分析仪的同时作显微镜检查具有不可替代的重要性，因为目前国内使用的血细胞分析仪都是根据细胞的体积大小分类，它不能深人到细胞内部进行分析, 故不能识别血细胞的异常结构，如异常细胞、中毒颗粒、疟原虫等, 因此建议在做血液自动分析时, 同时做显微镜检查, 以保证结果的准确性和可靠性, 以免漏检或误诊。

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显微镜种特种物镜的介绍和识别

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特种物镜
上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制造的物镜。如：相差物镜，带校正环物镜，带视场光阑物镜，无应变物镜，无荧光物镜，无盖片物镜，长工作距离物镜等。带校正环物镜：在物镜的中部装有环装的调节环，当转动调节环时，可调节物镜内透镜组之间的距离，从而校正由盖玻片厚度不标准引起的覆盖差.调节环上的刻度可从0.11–.023，在物镜的外壳上也标科有此数字，表明可校正盖玻片从0.11-0.23mm厚度之间的误差。
带视场光阑物镜：在物镜镜筒内的上部装有虹彩光阑，外方也可以旋转的调节环，转动时可调节光阑孔径的大小，这种结构的物镜是高级的油浸物镜，它的作用是在暗视场镜检时，往往由于某些原因而使照明光线进入物镜，使视场背景不够黑暗，造成镜检质量的下降.这时调节光阑的大小，使背景变黑，使被检物体更明亮，增强镜检效果.另一作用是当缩小光阑时。物镜的有效直径也随之缩小，改变孔径角，从而相应地起到降低数值孔径而增大焦深的作用。
无应变物镜：这种物镜在透镜组的装置中克服了应力的存在，是专门作为透射式偏光镜检用的物镜，能达到更佳的偏光镜检效果。在物镜外面常常标有PO或POL的字样。
无荧光物镜：是专门用于落射式荧光显微镜上的物镜。这种物镜即使受到很强烈的激发光源也不发出荧光。因此背景不发荧光，可以得到清晰明亮的图像。这种镜头外表面标记有UVFL的字样。
无盖片物镜：有些被检物体，如涂抹制片等，上面不能加用盖玻片，这样在镜检时应使用无盖片物镜，否则图像质量将明显下降，特别是在高倍镜检时更为明显。这种物镜的外壳上常标刻ＮＣ，同时在盖玻片厚度的位置上没有0.17的字样，而标刻着“0”。
长工作距离物镜：这种物镜是倒置显微镜的专用物镜， 它的焦距大于普通物镜，是为了满足组织培养，悬浮液等材料的镜检而设计这种物镜。相差物镜：这种物镜是由于相差镜检术的专用物镜，其特点是在物镜的后焦平面处装有相板。筒长无限的显微物镜有一种所谓筒长无限的显微物镜，这种物镜的后方一般带有辅助物镜(也叫补偿物镜或镜筒物镜)，被观察物体位于物镜前焦点上，经过物镜以后，成像在无限远，再经过辅助物镜成像在辅助物镜的焦平面上.在物镜和辅助物镜之间是平行光，所以中间距离比较自由一些，可以加入棱镜等光学元件。
物镜的识别
物镜通常都标有表示物镜光学性能和使用条件的一些数字和符号。如“40/0.65”和“160/0.17”。此处的40表示它的放大倍数（有的写成40×或40：1）；0.65表示它的“数值孔径”（有的写成N.A.0.65或A. 0.65）；160表示使用该物镜时，显微镜的机械筒长应为160mm（所谓机械筒长是指取下物镜和目镜以后，所剩下的镜筒长度。显微镜的机械筒长现已统一规定为160mm）；0.17表示使用该物镜时，盖玻片的厚度应为0.17mm。有些低倍物镜，在有、无盖玻片的情况下都可以使用，所以不标0.17 而代之以横线“－”，如果标记的是0，则表示不需要加盖玻片。有些油镜上标有“油（或oil）”字。

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激光显微切割技术及其在医学研究中的应用

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用于激光显微切割的植物组织制片技术的改进：激光显微切割技术最初是从医学中发展起来的。而植物细胞与动物细胞相比有很大的差异，植物细胞具有的细胞壁和液泡，尤其是多年生木本植物，存在细胞壁的次生加厚生长，更增加了组织样品制备的难度。而组织制备必须兼顾组织学和生物化学上的特性，既要使组织在视觉形态上尽可能完好，且同时能最大限度地回收核酸和蛋白质。近期有研究表明，对激光显微切割技术的参数作少许改变，就可以成功地应用于植物研究，从而在组织甚至细胞水平上革新对植物的组织、细胞的分子生物学研究。虽然最初的组织制备过程和切割条件的优化会是一个艰巨而复杂的过程，但对于植物学研究来说，这几乎是保证后续的DNA、RNA和蛋白质分析最为关键的步骤。
1.切片方法的选择与优化
一般显微切割技术的样品采用快速的冰冻制片法。该方法整个过程简便、耗时短，只需将组织用固定液固定之后再用包埋剂(例如OCT或者水等)包埋，最后在冰冻切片机上完成切片。冷冻组织提供了高质量可回收的大分子，故激光显微切割技术是切割动物组织时优先选用冰冻制片法。但是冰冻切片法也存在一些缺点，如频繁的冷冻会使组织内产生大的冰晶从而破坏了组织学特征，增加了形态辨认的难度。植物样品比动物样品的含水量要大得多，成熟的植物细胞中央大液泡可占据细胞体积的90%以上，其中的水分在样品的冷冻过程中极易形成冰晶，从而破坏细胞结构。因此常规冰冻切片法容易造成植物切片卷曲或断裂及细胞破碎等问题。
若对常规冰冻制片方法加以改进，使组织在制片过程中保持完好，则冰冻制片法就可以适合植物切片。如快速冷冻法能使水分在毫秒或者更短的时间内结晶，由于结晶的过程非常迅速，致使细胞内外的介质变得更为黏稠，无法形成较大的冰晶，因而植物样品能保持良好的形态结构。另外，还可以采用添加冷冻保护剂的方法。冷冻保护剂的作用机理是保护剂与组织细胞中的水分结合，降低细胞内溶液的冰点，使形成冰晶或较大冰晶的机会减小，从而减轻细胞内冰晶对细胞及其组分的损伤。根据以上特性，陈丹等人以蔗糖作为冷冻保护剂，采用液氮作为速冻剂，建立了蔗糖保护-液氮速冻法，较好地保存了植物样品的细胞结构，从而获得薄而结构完整的切片。这种方法适用于植物多种花器官，并且通过某些细节上的改进，可以推广到植物体的各种组织和器官。目前已经有一些采用冰冻切片法制片，进一步用激光显微切割技术从细胞水平和分子水平研究植物的报道。另一种制片方法是石蜡制切片法。虽然石蜡切片能保存完好的组织形态学特征，但是固定液可能会改变大分子的结构从而影响它们的完整性和可提取性。实验表明，加入沉淀类固定剂可以改善石蜡切片的性能。沉淀类固定剂(例如乙醇或丙酮)比醛类固定剂(例如甲醛等醛类物质)要好，因为前者对核酸和蛋白质有更好的复性作用。
石蜡包埋与冷冻组织切片相比，会对总体可提取的RNA和蛋白质有一定的降解作用。但仍可从动植物组织中获得相当数量的RNA在RT-PCR扩增之后作RNA表达分析。如Kerk等将LCM应用到玉米、西红柿的各种组织的石蜡切片中，从分离的不同细胞中分别提取RNA，扩增之后可适用于基因表达研究。目前用于激光显微切割的植物组织制片方法在不断改进和创新以适应激光显微切割技术的应用。Noriko Inada用快速微波石蜡法制备拟南芥叶片的切片。此方法制作的切片完好地保存了拟南芥叶片的形态，激光显微切割之后从叶片表皮和叶肉细胞中提取的RNA在RT-PCR之后足以应用于下游的微阵列等分析。
2.加强目标细胞识别的准确性
由于激光显微切割技术的组织切片与标准光学和电子显微镜技术的组织学标本有差别，对操作者鉴别与标准形态学有差异的目标细胞的能力提出了更高要求。又由于在激光显微切割技术中，载玻片上没有盖玻片，使得组织辨认更加困难，有时候为了识别一些特殊的细胞，会对目的细胞群体进行染色，但是有些染色过程不仅加快了活质物质的降解过程，而且可能会引起细胞成分发生未知的改变。用快速免疫染色技术则可以减少RNA的降解，另外，转基因植物中在特殊细胞类型里报告基因的表达也可以用来识别目标细胞。随着更完善的技术系统和商业试剂盒的问世，激光显微切割技术向着更加完善的方向发展，为植物细胞研究提供了一个便捷可靠的平台。总之，近年来激光显微切割技术越来越多在植物研究中应用，实验质量也在逐步提高， 使这一技术正成为植物研究者的常用工具。

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扫描电子显微镜的四种样品制备

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扫描电子显微镜(SEM)的样品制备
1 、块状试样的制备
块状试样包括导电性材料和非导电性材料。导电性材料主要是指金属，一些矿物和半导体材料也具有一定的导电。 这类材料的试样制备，只要使试样大小不得超过仪器规定（如试样直径最大为φ25mm，最厚不超过20mm等），经过清洗，然后用双面胶带粘在载物盘，再用导电银浆连通试样与载物盘（以确保导电良好），等银浆干了之后就可放到扫描电镜中直接进行观察。 非导电性的块状材料试样的制备基本可以像导电性块状材料试样的制备一样，只是在导电性材料制备基础上需在样品表面喷镀一层导电层即可。对非导电的试样，例如陶瓷、玻璃、有机物等，在电子束扫描下，表面会积累负电荷，使样品表面形成一个较强的负电位，产生充电现象。样品的负电位抵消掉入射电子部分能量，使二次电子发射和运动不稳定。在电子探针的图像观察、成分分析时，会产生电子束漂移、表面热损伤等现象，使分析点无法定位、图像无法法聚焦。
2、粉末试样的制备粉末样品制备，
首先在载物盘上粘上双面胶带，然后取少量粉末试样放在胶带上的靠近载物盘圆心部位，接着用吹气橡胶球朝载物盘径向朝外方向轻吹，以使粉末可以均匀分布在胶带上，也可以把粘结不牢的粉末吹走。然后在胶带边缘涂上导电银浆以连接样品与载物盘，等银浆干了之后就可以进行最后的镀一层导电膜。对于小于5μm小颗粒，要得到较好的分析结果，最好将粉体用压片机压制成块状，此时标样也应用粉体压制。对细颗粒的粉体分析时，特别是对团聚体粉体形貌观察时，需将粉体用酒精或水在超声波机内分散，再用滴管把均匀混合的粉体滴在试样座上，待液体烘干或自然干燥后，粉体靠表面吸附力即可粘附在试样座上。
3、溶液试样的制备
对于溶液试样一般采用薄铜片作为载体。首先，在载物盘上粘上双面胶带，然后粘上干净的薄铜片，然后把溶液小心滴在铜片上，等干了之后观察析出来的样品量是否足够，如果不够再滴一次，等再次干了之后就可以涂导电银浆和镀膜了。
4、生物试样的制备
扫描电镜生物样品的制备，必须满足以下要求：①保持完好的组织和细胞形态；②充分暴露欲观察的部位；③良好的导电性和较高的二次电子产额；④保持充分干燥的状态。一般采用化学方法制备样品，其程序通常是：清洗→化学固定→干燥→镀膜。    清洗　某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道内的食物残渣、细菌、淋巴液及粘液等异物，掩盖着欲观察的部位，因而，需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。亦可用 5％碳酸钠冲洗或酶消化法去除这些异物。
（1）固定通常采用醛类(主要是戊二醛和多聚甲醛)与四氧化锇双固定，也可用四氧化锇单固定。四氧化锇固定不仅可良好地保存组织细胞结构，而且能增加材料的导电性和二次电子产额，提高扫描电子显微图像的质量。这对高分辨扫描电子显微术是极端重要的。
（2）干燥固定后通常采用临界点干燥法。其原理是：适当选择温度和压力，使液体达到临界状态（液态和气相间界面消失），从而避免在干燥过程中由水的表面张力所造成的样品变形。对含水生物材料直接进行临界点干燥时，水的临界温度和压力不能过高(37.4℃，218帕)。
（3）镀膜将干燥的样品用导电性好的粘合剂或其他粘合剂粘在金属样品台上，然后放在真空蒸发器中喷镀一层50～300埃厚的金属膜。

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使用显微镜基础步骤和注意事项

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一．显微镜使用的一般步骤：
1、取镜与安放：右手握镜臂，左手托镜座放在前方稍偏左。
2、对光：（1）转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。（2）选较大的光圈对准通光孔，左眼注视目镜，转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内，通过目镜，可以看到白亮的视野。
3低倍镜观察：
（1）标本放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。
（2）转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（此时实验者的眼睛应当看物镜头与标本之间，以免物镜与标本相撞）。
（3）左眼看目镜内，同时反向转动粗准焦螺旋，使镜筒上升，直到看到物像为止，再稍稍转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
4.高倍镜观察：
（1）移动装片，在低倍镜下使需要放大观察的部分移动至视野中央。
（2）转动转换器，移走低倍物镜，换上高倍物镜。
（3）调节细准焦螺旋，使物像清晰。
（4）调节光圈和反光镜，使视野亮度适宜。
5、使用完毕后，
取下装片，转动转换器，逆时针旋出物镜，旋进镜头盒；取出目镜，插进镜头盒，盖上。把显微镜放正。

二、显微镜使用的一些注意问题：
1、等于目镜的放大倍数和物镜的放大倍数的乘积，该放大倍数指的是长度或宽度，而不是面积和体积。
2、物镜镜头长度与放大倍数成正比；目镜镜头长度与放大倍数成反比。高倍镜镜面较小，低倍镜镜面较大
3、视野：视野是指一次所能观察到的被检标本的范围。视野的大小与放大倍数成反比，放大倍数越小，视野范围越大，看到的细胞数目越多，工作距离越长；放大倍数越大，视野范围越小，看到的细胞数目越少，工作距离越短。
4、镜像亮度：镜像亮度是指视野里所看到的像的亮暗程度。它与放大倍数成反比，即在光源一定的情况下，放大倍数越大，视野越暗。在用高倍镜或物镜观察标本时，根椐实际情况可使凹面反光镜、大光圈来增强光源，以改善视野亮度而使物像明亮清晰。
5、视野中物像移动与标本移动的关系：视野中某观察对象位于左前方如要移到中央，应将装片或切片向左前方移动。也就是同向移动。原因是视野中物像移动的方向与装片或切片移动的方向相反。
6、显微镜使用时的异常现象与原因（1）有气泡：制作装片不规范；材料厚薄不均匀；水太少（2）同一视野一部分清晰另一部分不清晰：材料厚薄不均匀（3）视野太亮：光线太强；调节光圈和反光镜（4）视野一半亮，一半不亮，反光镜没有转到位7、显微镜使用时异物的判断：目镜、物镜或装片上，通常通过移动玻片（是否在玻片上），转动转换器（是否在物镜上）来判断，剩下在目镜上。

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校准金相显微镜示值误差的三个方法

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方法一
这一检定法应在不同的放大倍数条件下进行。最宽的单刻线样板用于检定放大倍数最小的物镜，其余依此类推。（本规程推荐用单刻线样板标准器组中最宽和次宽的样板检定）将单刻线样板置于仪器的工作台上，调整仪器使样板在视场出现清晰的象，借助仪器工作台的微分筒移动样板，使单刻线的应用段连同两个记号呈现在仪器目镜的分划板中；旋转目镜角度，使样板的刻线方向与分划板的刻线垂直，并读出在单刻线宽度上所包含的分划板的刻线数。物镜的格值C 乘以刻线数i 即为仪器测得的单刻线宽度值。金相显微镜示值误差δ 可由下式确定：δ=( L标 ? L测)/L标×100%（式中：L 标 –检定证书上所标明的样板刻线宽度）用单刻线样板以相同的方法对各种物镜分别进行检定，其示值误差δ 均不超过相关规定。
方法二
如被检仪器的格值是用随机0.01mm 测微尺标定的，我们可用标准测微尺检定示值误差。我们将标准测微尺置于仪器工作台上，调整测微尺标尺轴线与仪器目镜分划板标尺轴线平行，并读出目镜分划板i 条刻线里包含测微尺n 条刻线数。仪器测得的长度L 测= iC,其所对应的标准测微尺长度为L 标=n×0.01mm,则金相显微镜的示值误差为：δ=( L标 ? L测)/L标×100%（式中：L 标 –检定证书上所标明的标准测微尺长度）用标准测微尺以相同的方法对各种物镜分别进行检定，其示值误差δ 均不超过相关规定。（实验室及研究用金相显微镜推荐用此方法进行检定）
方法三
在检定数码金相显微镜、便携式视频金相显微镜、万能金相显微镜、图像分析仪时，我们将单刻线样板或标准测微尺置于工作台上，用仪器显示器像素长度值，可直接读出单刻线的宽度值或测微尺的长度值。金相显微镜示值误差δ 可由下式确定：δ=( L标 ? L测)/L标×100%
（式中：L 标 –检定证书上所标明的样板刻线宽度和标准测微尺长度。）用上述各级样板或标准测微尺以相同的方法对各种物镜分别进行检定，其示值误差δ 均不超过相关规定。2.7. 随机0.01mm 测微尺示值误差我们将测微尺置于阿贝比长仪工作台上，调整测微尺使其标尺轴线与工作台移动方向平行并对好零位,按每20 格测量一次,直至第100 格,其误差不大于3μm。

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紫外线灯管对周围环境的改变

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有媒体报道：用高硼紫外线灯与石英紫外线灯分别对已知不同种细菌进行照射，结果细菌在石英玻璃管紫外线灯照射下的存活数均较少，而在高硼玻璃管紫外线灯照射下较高，故应首选石英玻璃紫外线灯。目前紫外线灯的质量也有学者作过调查，8只全新紫外线灯经强度检测仪检测，强度为（47.4 ± 3.9）μW/cm，根据我国《杀菌管理条例》对新灯管的强度要求不得低于100μW/cm，故8只全新灯管无一符合标准，所以评定紫外线灯管的优劣不能根据新旧、是否产生蓝色光、是否形成臭氧作判断，必须检测其强度。
紫外线灯管在有无反光罩或不同材料的反光罩下所测得的强度差异较大，如1支在木板式反光罩下的灯经测试强度<7μW/cm，应属不合格灯管，但改置在抛光铝制反光罩下，强度升高，即可达合格要求，但这种利用反光罩提高照射强度而改判灯管合格是欠妥的，理由是：因灯管所放射出的紫外线强度实际并未改变。对新灯管的强度测定应在无反光设备的条件下进行，为方便工作，可经实验测定各种反光罩的修正系数，将带反光罩时测得的结果除以修正系数，即可得不带反光罩时照射强度值。例：1 只灯管在无罩下强度为100μW/cm时，而改置在抛光钻罩下强度为155μW/cm，则修正系数为：155/100=1.55。以后凡在抛光铝罩下测得的强度均应除以1.55。这样就可将部分强度不够标准的灯管淘汰，以便更稳妥、有效地实施紫外线杀菌。

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传感器技术

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在今后将有十分广阔的发展前景。目前新型传感器技术包括固态硅传感器技术、光纤传感器技术、生物芯片技术、基因芯片技术、图像传感器技术、全固态惯性传感器技术、多传感器技术等。十二五将以智能传感器作为重点，进行关键技术攻关。
在这一领域，重点发展新原理、新效应的传感技术，传感器智能技术，传感器网络技术，微型化和低功耗技术，以及传感器阵列及多功能、多传感参数传感器的设计、制造和封装技术。

1、工业无线通信网络技术
工业无线通信网络作为有线工业通信网络的补充，已经得到普遍认同。我国在工业无线通信网络方面已经取得一定成果，继续加强开发有可能在这方面走在世界前列。而在这一领域，宜重点关注工业无线通信网络标准的制订，以及工业无线通信网络认证技术。

2、功能安全技术及安全仪表
功能安全技术及安全仪表是国际上最近发展的新技术，目的是防止工业设施产生异常事故，以致危及人身与设备的安全。这项技术及相关仪表产品已经获得用户的广泛关注。我国大型石化工程建设项目已经规定必须事先进行功能安全的评估。我国工业设施突发事故发生比较频繁，研究安全仪表技术有很重要的意义。这一领域重点发展的产品包括：达到整体安全等级SIL3的控制系统、温度变送器、压力/压差变送器、电动执行机构/阀门定位器的开发与应用，同时也包括安全仪表系统评估技术方3、法研究和评估工具的开发。

3、精密加工技术和特殊工艺技术
我国高中档检测设备与国外的差距很大程度上是精密加工和特殊工艺技术的差距。当前的重点是多维精密加工工艺，精密成型工艺，球面、非球面光学元件精密加工工艺，晶体光学元件磨削工艺，特殊光学薄膜设计与制备工艺，精密光栅刻划复制工艺，特殊焊接、粘接、烧结等特殊连接工艺，专用芯片加工技术，MEMS技术，全自动微量、痕量样品分析与处理技术等。

4、分析仪器功能部件及应用技术
对分析仪器的关键部件，如检测器、四级杆、高压泵、阀门、磁体、专用光源和电源、全自动进样器、长寿命高灵敏电极、中阶梯光栅、高精度电子引伸计等关键零部件进行攻关，提高仪器整机的稳定性和可靠性。同时开发针对不同应用领域的谱图和数据库。

5、智能化技术
智能化技术的特点是：具有自校准、自检测、自诊断、自适应功能具有复杂运算和误差修正的数据处理能力具有自动完成指定测量任务的功能用于科学测试仪器和控制系统的专家系统软件等。

6、系统集成和应用技术
当前应重点发展不同生产厂商控制系统之间的无缝连接集成技术大型项目的自动化设备主供应商应具备的项目策划、设计、组织、采购、验收、调试等项目管理技术。

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荧光显微镜选择光源问题

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我们在选择荧光显微镜的光源时，要注意的是弧光的尺寸，就是光源发光区的大小，例如50W的汞灯，它的弧光尺寸为110X0.13MM，200W的弧光尺寸为212X0.15MM，而100W的弧光尺寸为0.125×0.125m，能否正好充满系统的入瞳使光能充分的利用，对一个优良的荧光显微镜，以及各种倍率的物镜“光能”皆可充分有效的利用是一个值得关注的指标。在荧光显微镜设计中，光源的选择在总体设计中是至关重要的，它决定了仪器的使用范围和成本，也反映了仪器的档次。实验室以上的显微镜应以汞灯为主光源，简易型(专用)的显微镜则常用以卤素灯作为主光源。

其次我们还要考虑的问题就是它的功率，是采用大功率的灯泡，还是选择低瓦数的灯泡呢？原则上讲应尽可能选用低瓦数的光源，无疑这对结构设计和成本是有利的。但过低的瓦数在激发时不能激发出荧光或者发出的荧光不稳定，就不能使用了。但是能否激发出荧光又与整个成像系统的光能利用有关系，如何能充分合理有效地利用光能，瓦数是可以降下来，但是如果我们单纯地追求大功率光源作为荧光检测并不可取，因为它会引发荧光的衰减和猝灭。当前供应的落射荧光显微镜仅配备100W的汞灯或氙灯和卤素灯。