上海光学仪器厂

荧光显微镜使用注意事项

常见问题

荧光显微镜是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体，使之受激发后而产生长波长的荧光，然后观察。荧光显微镜广泛应用于生物，医学等领域。
（1） 荧光显微镜一般分为透射和落射式两种类型。
a. 透射式：激发光来自被检物体的下方，聚光镜为暗视野聚光镜，使激发光不进入物镜，而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮，而高倍则暗，在油浸和调中时，较难操作，尤以低倍的照明范围难于确定，但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。
b.落射式：透射式目前几乎被淘汰，新型的荧光显微镜多为落射式，光源来自被检物体的上方，在光路中具有分光镜，所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用，不仅便于操作，而且从低倍到高倍，可以实现整个视场的均匀照明。

（2） 荧光镜检术的注意事项
a. 激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象，因此尽可能缩短观察时间，暂时不观察时，应用挡板遮盖激发光。
b. 作油镜观察时，应用”无荧光油”。
c. 荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。
d. 电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。

金相显微镜延长寿命的方法

常见问题

延长金相显微镜的使用寿命的方法：使用时显微镜时应注意以下几点：(现以金相显微镜的使用方法为例作为说明)

1、条件许可情况下，建议您的试验室应具备三防条件：防震(远离震源)、防潮(使用空调、干燥器)、防尘(地面铺上地板)；电源：220V±10%，50HZ；温度：0°C—40°C。

2、亮度调整切忌忽大忽小，也不要过亮，影响灯泡的使用寿命，同时也有损视力。

3、所有(功能)切换，动作要轻，要到位。

4、关机时要将亮度调到最小。

5、调焦时注意不要使物镜碰到试样，以免划伤物镜。

6、当载物台垫片圆孔中心的位置远离物镜中心位置时不要切换物镜，以免划伤物镜。

7、非专业人员不要调整照明系统(灯丝位置灯)，以免影响成像质量。

8、更换卤素灯时要注意高温，以免灼伤；注意不要用手直接接触卤素灯的玻璃体。

9、关机不使用时，将物镜通过调焦机构调整到最低状态。

10、关机不使用时，不要立即该盖防尘罩，待冷却后再盖，注意防火。以上几点仅是一些应特别注意的地方。希望大家在使用过程中应小心加细心，如确实在使用金相显微镜时有遇到难题自己无法解决时，可立即电话联系本叁诺公司寻找解决方法。

偏光显微镜常识

常见问题, 技术支持

偏光显微镜在光学显微镜的光学系统中插入了起偏振镜和检偏振器，用以检查样品的各向异性和双折射性的显微镜。起偏振镜和检偏振镜都是由偏光棱镜或偏光板的尼科耳(nicol)棱镜制成。前者安装在光源与样品之间，后者安装在接物镜与接目镜之间或接目镜之上。在生物样品中，肌肉纤维、骨骼和牙齿等具有各向异性，淀粉粒、染色体和纺锤体等具有双折射性，因此被用于组织细胞的化学研究。光源最好用单波长光线。由于生物样品比金相、岩石或结晶的双折射性显著微弱，所以有时也借敏感的检偏振板造成的相加相减现象而利用其干涉色。

偏光显微镜：http://www.shoif.com/old_version/industry/pianguang/

偏振光的基础知识

一、自然光和偏振光

光是一种电磁波，属于横波(振动方向与传播方向垂直)。一切实际的光源，如日光、烛光、日光灯及钨丝灯发出的光都叫自然光。这些光都是大量原子、分子发光的总和。虽然某一个原子或分子在某一瞬间发出的电磁波振动方向一致，但各个原子和分子发出的振动方向也不同，这种变化频率极快，因此，自然光是各个原子或分子发光的总和，可认为其电磁波的振动在各个方向上的几率相等。

自然光在窗过某些物质，经过反射、折射、吸收后，电磁波的振动波以被限制在一个方向上，其他方向振动的电磁波被大大削弱或消除。这种在某个确定方向上振动的光称为偏振光。偏振光的振动方向与光波传播方向所构成的平面称为振动面。

二、直线偏振光、圆偏振光及椭圆偏振光

1.直线偏振光

直线偏振光由于光线的振动方向都在同一个平面内，所以这偏振光又叫作平面偏振光正对光的传播方向看去，这种光的振动方向是一条直线，因此又叫直线偏振光或线偏振光。

2.圆偏振光和椭圆偏振光

(1)光的双折射现象和晶体的光轴

当一束光线射入各向异性的晶体中时要分裂为两束沿不同方向传播的挑线，这种现象叫双折射现象发生双折射的两束光线都是偏振光。这两束光线之一恒遵守光的折射定律，在改变入射方向时传播速度不发生变化，这条光线称为寻常光线，用o表示;另一束光线不遵守折射定律，当入射光线方向变化时，它的传播速度也随之变化，光的折射率不同，这束光称为非常光用e来表示。

在各向异性晶体中，存在有某些特殊方向，在这些方向上不发生双折射，寻常光线和非常光线传播方向和传播速度相同，这些方向称为]晶体的光轴有一个光轴的晶体叫一轴晶，有两个光轴的晶体叫二轴晶。对于二轴晶，双折射后的两束光线均为非常为光线。

(2)波晶片

波晶片简称波片，可用来改变或检验光的偏振情况。当自然光沿一轴晶光轴入射时，不发生双折射现象。如果垂直于晶体光轴入射时产生的o光和e光仍沿原入射方向传播，但传播速度和折射率不同，且传播速度相差最大。如果在平行于一轴晶光轴方向上切下一薄片，这时晶片表面与光轴平持，这样制得的晶片叫]波晶片当偏振光垂直于波片光轴入射时，在波片内形成传播方向相同但传播速度不同的o光和e光。

如果波片越厚，o光和e光线波波长的整数倍，这种波片叫全波片。依此类推，还有半波片和1/4波片等等。

(3)圆偏振光和椭圆偏振光的形成

一束自然光以垂直于一轴晶的光轴方向入射所产生的振动面互相垂直的两束偏振光是不相干的。因为自然光是由光源中的不同分子和原子产生的，没有固定的位相差，所以不发生干涉。但是当一束单色偏振光通过双折射物质[/url]后，所产生的两束偏振光是可以相干的。相当于两个互相垂直的同周期的振动的合成。

当一束偏振光垂直于一轴晶光轴入射时产生两束偏振光(o光和e光)。由于o光和e光的相位差不同而合成为直线偏振光、]圆偏振光椭圆偏振光。O光和e光的相位差由两束光在晶片中折射率和晶片的厚度决定。设No、Ne分别为o光和e光的折射率，d为晶片的厚度，所产生的相位差为Δφ。则。改变晶片的厚度可得不同相位差的o光和e光。当Δφ为π/2的偶数倍时可产生直线偏振光;当Δφ为π/2的奇数倍时，可产生圆偏振光;当Δφ不是π/2的整数倍时均可产生椭圆偏振光。圆偏振光的振动端点在光的传播方向上投影为一个圆，椭圆偏振光的振动端点在光的传播方向上投影为一个椭圆。圆偏振光和椭圆偏振光在每一瞬间只有一个振动方向，所以仍属偏振光。

特殊显微镜的应用

常见问题

1．荧光显微镜（fluorescencemicroscope）是用来观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构。荧光显微镜是以高压汞灯产生的短波紫外线为光源，并配有激发、阻断、吸热和吸收紫外线等滤片系统，标本中的荧光物质在紫外线激发下产生各种颜色的荧光，借以研究该荧光物质在细胞和组织内的分布。组织中的自发性荧光物质如神经细胞和心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光，肝贮脂细胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈绿色荧光，某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类物质（儿茶酚胺、5－羟色胺、组胺等）在甲醛作用下呈不同颜色的荧光，组织内含有的奎宁、四环素等药物也呈现一定的荧光。细胞内的某些成分可与荧光素结合而显荧光，如溴化乙锭与吖啶橙可与DNA综合，进行细胞内DNA含量测定。荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究，即以异硫氰酸或罗丹明等荧光素标记抗体（一抗或二抗），用该标记抗体直接或间接地与细胞内的相应抗原结合，以检测该抗原的存在与分布。

荧光显微镜：http://www.shoif.com/old_version/life/yingguang/

2．相差显微镜（phasecontrastmicroscope）是用于观察组织培养中活细胞形态结构的。活细胞无色透明，一般光镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。相差显微镜的特点是将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用，转换为光密度差异（明暗差），使镜下结构反差明显，影像清楚。组织培养研究常用的是倒置相差显微镜（invertedphasecontrastmicroscope），它的光源和聚光器在载物台的上方，物镜在载物台的下方，便于观察贴附在培养器皿底壁上的活细胞。

3．暗视野显微镜（dark-fieldmicroscope）主要用于观察因反差或分辨力不足的微小颗粒。此种显微镜主要是有一个暗视野集光器，使光线不直接进入物境，故呈暗视野。而标本内的小颗粒产生的衍射光或散射光进入物镜，暗视野中的颗粒呈明亮小点，如同在暗室可见一束光线中的微小尘粒一般。普通通光镜最大分辨率为0.2μm，暗视野显微镜则可分辨0.004～0.2μm的微粒，适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动等。

4．共集激光扫描显微镜（confocallaserscanningmicroscope,CLSM）是近10年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以激光为光源，光束经聚焦后落在样品（组织厚片或细胞）不同深度的微小一点，并作移动扫描，通过电信号彩色显像，经过微机图像分析系统进行二维和三维分析处理。CLSM可对细胞进行三维结构图像分析，细胞内各种荧光标记物的微量分析，细胞内Ca2+、pH值等的动态分析测定，细胞的受体移动、膜电位变化、酶活性和物质转运的测定，并以激光对细胞及其染色体进行切割、分离、筛选和克隆。因此，CLSM是一种高技术产品，可对细胞的多种功能进行全自动、高效、快速的微量定性和定量测定。

其他如偏光显微镜用于研究组织晶体物质及纤维等的光学性质，紫外光显微镜用于研究细胞内核酸的分布与定量等。

显微镜鉴定陶瓷

常见问题

早在好几年前，有收藏家协会有发布过的《看图识宝》图册，里面有52件各时期的文物，有部分陶器和陶瓷还配有微观图像。他们之所以配有显微镜下的微观图像，是为了宣传和推广科学的鉴定方法，希望广大收藏爱好者能够认识并正确运用显微镜来观察文物的细部特征，如文物上的痕迹、纹理、纹饰、密度等，从而对文物的真伪做出正确判断。以下 就古瓷的方向详尽归纳用显微镜鉴别的根本依据。

鉴定陶瓷主要依据的理论基础：

陶瓷之美，是因为在土胎胚上加了不同釉色及各种颜料绘成图案，经高温烧制后，形成多种颜色及有精美纹饰的器物。古人在用釉及彩料上做到精心研究，精益求精，因而产生了神奇效果，同时也留下了特殊的印记，形成了今天我们鉴赏鉴定要寻找的“根”。

主要依据就是古瓷的“根”提供了的三个方面的鉴赏鉴定方向：

一、陶瓷的先天性。器物烧成后，有特殊纹理。如青花瓷，若使用进口苏麻离青料，其包下沉，有泛锡光或棕褐色结晶斑，为必然结果。苏料源绝已久，今人仿不出真料效果。还有黑釉瓷，因配方奥秘，古黑釉瓷微观，有自然形成花朵状、鱼鳞状、网状等特殊纹斑，难以仿制，

二、陶瓷的后天性。现存古瓷，不管传世或出土，几百年间与外界水、土、酸、碱接触受腐蚀，必然产生各种印记，如产生变色泡、破口泡片纹变粗，表层有腐蚀点、腐蚀斑块、脱釉露胎等现象，这些老化痕迹不可仿制，因而也成为我们今天鉴定古瓷的“根”，这种微小的变化在人的肉眼下是很难被察觉的，而借助陶瓷鉴定专用便携式数码显微镜在40倍率左右就可清晰寻找到相应的证据。

三、“两种根”在同一古瓷存在的情况也有：如清代粉彩瓷，当时嫩青料，蓝料，用的是珐琅彩，开小片，及嫩青料有细小银灰色的鱼子斑，属先天性的“根”。而到现在，彩料上面有腐蚀斑色，这是以后形成的老化痕迹，成为后天性的“根”。还有明早期以前使用苏麻离青料的青花瓷，结晶斑是先天性的根，有变色气泡是后天性的根。

以上三方面仅是陶瓷鉴赏鉴定方法仅是应用便携式显微镜鉴定的一点滴总结。而对陶瓷“真不真，老不老”的问题，本是长期困扰着广大古陶瓷收藏爱好者，且现在无论从出版的有关鉴定类书籍，还是培训班上老师讲授的“五看”，即看器型、看纹饰、看款识、看釉彩、看工艺，可这些传统的鉴定方法，早已被现代技艺熟谙的仿古者所掌握，许多仿古作品惟妙惟肖，连专家也经常看走眼，从而借助显微镜这种现代工具是收藏爱好者与专家学者们的必然选择，学习与不断总结经验是避免掏取高昂“学费”的方法。

显微镜观察鉴别纤维

常见问题

根据纤维的什么形态,看纤维的一般外观,视频显微镜,检测显微镜,体视显微镜都可以看得清楚,但看纤维切片的话,用生物显微镜才能更好的看清楚些,要求不同,需求不同。利用显微镜观察纤维的纵向和截面形态特征来鉴别各种纤维，是广泛采用的一种方法。

它既能单一成分的纤维，也可以用于多种成分混合而成的混纺产品的鉴别。天然纤维有其独特的形态特征，如棉纤维的天然转曲，羊毛的鳞片，麻纤维的横节竖纹，蚕丝的三角形截面等，用生物显微镜能正确地辨认出来。

显微镜测微尺的使用

技术支持

如何用目镜测微尺测量
显微测微尺是用来测量显微镜视场内被测物体大小、长短的工具, 包括目镜测微尺(分划目镜)和测微台尺。用时需两者配合使用。目镜测微尺系在目镜的焦面上装有一刻度的镜片而成, 其每一刻度值为0.1mm, 测微台尺为一特制的载玻片, 其中央有刻尺度, 每一小格的值为0.01mm, 使用时, 先将目镜测微尺插入目镜管, 旋转前透镜将目镜内的刻度调清楚, 在把测微台尺放在载物台上, 调焦点到看清楚台尺的刻度。观察时先将两者的刻度从“0”点完全重叠, 在向右找出两尺又在何处重叠, 然后记下两尺重叠的格数, 以便计算出测微尺每小格在该放大率下的实际大小。

测量时不再用测微台尺, 如改变显微镜的放大赔率, 则需对目镜测微尺重新进行标定.

计算公式: 台尺重叠格数×10

目尺重叠格数

例如:目镜测微尺上的第五小格与测微台尺上的第八格重叠=8×10

则目镜测微尺上的每小格:16um=(8×10)/5

测量时不再用测微台尺, 如改变显微镜的放大赔率, 则需对目镜测微尺重新进行标定.

检测化妆品内石棉含量的方法

常见问题

近年来，随着经济的不断发展，化妆品工业也获得了更大的发展空间，而化妆品安全也随之成为了人们关注的重点问题。在化妆品生产过程中，经常需要使用如滑石、云母等矿物质作为辅料，而这些矿物的形成过程中常常会伴有石棉，比如闪石石棉就是滑石中较为常见的矿物。石棉与人的身体或者皮肤直接接触，会对人体产生一定的危害，影响身体健康。随着近年来化妆品行业的不断发展，石棉问题也受到了更多的关注，在欧美以及日韩等国家都对进出口化妆品中的石棉含量进行了严格的规定，并且制定了相应的标准。我国在2009年制定了《粉状化妆品及其原料中石棉测定方法》的暂行标准，为我国化妆品石棉检测工作提供了参考和依据，同时也为提高化妆品品质提供了基本的保障。本文就主要针对化妆品中石棉含量的检测方法进行简单的分析。

一、X-射线衍射法（XRD）

XRD的检测原理主要是根据每种矿物都具有特殊的X-射线衍射数据这一特性而进行检测的，不同矿物的衍射峰的强度与其含量有着一定的比例关系，因此可以以此为依据对某物质中是否含有石棉以及其含量进行测定。这种方法可以用来鉴别是否存在石棉，以及石棉的种类和数量。XRD具有五种度量分析的方法，较为常用的是K值和绝热发。利用XRD检测石棉用量较小，而且居于较好的重现性，检测的速度也较快，尤其适用于对粉状化妆品中的石棉进行检测，该方法也是当前国内使用的较为普遍的一种方法。当然，在学术界对于XRD也存在着一定的之呢过以，有的学者认为XRD检测法的灵敏度较低，检出限过低，只能够用来检测石棉含量不低于1%的检测。但是关于检出限的问题，也是一个十分复杂的问题，对于检出限的影响因素也很多，只要能够对检测因素进行有效的控制，便能够实现对检出限的有效控制，将其控制在低于1%的范围内。目前，常用的提高XRD检测灵敏度和分析精度的方法的主要途径是提高光源功率、采用高强度的旋转阳极X-射线发生器等。

二、光学显微镜法

1.偏光显微镜法（PLM）

每一种矿物中都含有独特的矿物光性和形态特征，因此通过偏光显微镜的观察，能够对矿物中晶体的形状产生不用的表现，通过这些不同的特征来对石棉进行判断。在偏光显微镜下，不同的石棉也会呈现不同的状态，如温石棉为细长型的纤维形状，而且呈现出黄绿色。闪石类石棉的折射率较高。利用PLM法能够有效的实现对石棉种类的鉴别，能够对直径超过0.25μm的石棉进行鉴别，也是当前国际各国都广泛使用的鉴别方法。从理论上说，PLM最大能够达到1000倍的放大效果，但是在实际从操作中会受到操作人员以及其他因素的影响，所以通常使用的PLM倍数一般是在400～600左右。

2.相差显微镜法（PCM）

PCM原理是将透过标本的可见光的光程差变成振幅差，光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ，如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减小，提高反差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见，这样得以大幅提高检测精度。因此，该方法是各国空气中微量石棉检测标准中广泛采用的方。但PCM法不能准确辨别纤维种类，在浓度较大时，检测精度会受到影响， NIOSH标准PCM适用于石棉纤维直径大于0.25μm，但也有文献认为PCM适用于石棉纤维长度大于5μm，长径比大于3的石棉。

三、电子显微镜法

电子显微镜法的运用主要是利用成像原理，将其分为扫描电镜法和投射电镜法，其中投射电镜的分辨率相比扫描电镜更高。与光学显微镜相比，电子显微镜具有更大的放大倍数和更高的分辨率。电子显微镜是当前国内外使用较多的方法，尤其是针对大气粉尘以及水中的石棉石检测，其具有其他方法无法比拟的优势。

四、红外光谱法（IR）

IR从某些方面来说，与XRD具有一定的相似性，其主要是利用不用的矿物所特有的红外吸收谱的特征来对矿物进行鉴别和分析，比如闪石的石棉一般在752-760cm1左右处有一特征吸收带，其中青石棉蓝闪石的吸收带稍高，在777-786cm-1。该反应带的反应较为灵敏，而且其强度与石棉的含量成澄碧，因此可以利用红外光谱对石棉进行检测。但是，红外光谱法也存在弊端，其能够判断出是否含有石棉，但是对石棉的类型却无法有效的区分，无法进行定量分析，因此，红外光谱法一般都被用作辅助手段，很少单独使用。关于红外光谱法的先关标准较为缺乏。

五、差热分析法（DTA）

DTA指的是在程序控温条件下，对于测量物质和参照物的温度差与温度或者是时间的关系进行测定。比如蛇纹石类的石棉温差特征是在750～800℃有吸热的特征，而伴随着这个吸热谷的出现，就会出现一个放热的高峰。不同的矿物中含有不同的成分，而且成分会随着温度的变化而出现规律的变化，进而引起DTA曲线的特征发生变化。

荧光显微镜标本制作要求及方法

技术支持

荧光显微镜标本制作要求

(一)载玻片

载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。

(二)盖玻片

盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光女可激发标本。

(三)标本

组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。

(四)封裱剂

封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/l pH9.0～9.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。

(五)镜油

一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。

三、使用荧光显微镜的注意事项

(1)严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。

(2)应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。

(3)防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。

(4)检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。

(5)荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节　省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。

(6)标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。

(7)荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“一”—无或可见微弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明亮的荧光。“+++”—可见耀眼的荧光。

四、荧光图像的记录方法

荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上可靠的。随着技术科学的发展，在不同程度上采用客观指标记录判断结果，如用细胞分光光度计，图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果，也必须结合主观的判断。

荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要，由于荧光很易褪色减弱，要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。只是需要采用高速感光胶片如ASA200以上或24。以上。因紫外光对荧光猝灭作用大，如FITC的标记物，在紫外光下照射30s，荧光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。

XSP-BM22AY 科研级三目荧光显微镜

标本的制作方法

样品须经过石蜡包埋切片，然后用铁矾苏木精染色，普通光镜观察效果还可以.

作荧光观察需用荧光染料DAPI染色，

石蜡切片的过程：

1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.

2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.

注意: (1). 固定液量应为组织块体积的40倍.

(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.

(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.

(4)固定容器应大些.

3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.

4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.

70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’).

5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.

6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.

7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.

8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.

也可作冰冻切片.

荧光染料的配制：

储藏液：1mg/ml dapi(DMSO、去离子水、pbs都可以溶解)

工作液：通常1μg/ml

染色时须避光，10min左右

用pbs冲去多余染液即可观察。

我公司荧光显微镜产品：http://www.shoif.com/old_version/life/yingguang/