上海光学仪器厂

显微镜的相差镜检法（Phase contrast PH）

常见问题

    在光学显微镜的发展过程中，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.
    相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。
    相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：
1. 环形光阑（annular  diaphragm） 位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。
2. 相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种：
1. A+相板：将直射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。
2. B+相板：将衍射光推迟1/4λ，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗

用相差显微镜做实验的步骤

技术支持

   相差显微镜的使用，较之普通显微镜术要复杂些，但亦易于掌握，按下列过程进行操作。如前所述，相差显微镜区别于普通光学显微镜的装置主要有相差物镜、转盘聚光器、合轴调中望远镜和绿色滤色镜四种部件。使用时将这些部件调换安装在同型号的普通光学显微镜上，即成为相差显微镜。 1．相差物镜的调换安装从物镜转换器上拆下普通物镜，旋入相差物镜，与普通目镜配套使用。 2．转盘聚光器的调换安装旋转聚光器升降螺旋，把普通明视场聚光器至最低位，旋松固紧螺丝，卸下聚光器。把转盘聚光器安放到相应位置上，旋紧固紧螺丝，转动聚光器升降螺旋，使聚光器升至最高位置。转盘聚光器的标示孔，朝向操作者。此时，转盘聚光器上面的聚光镜部分，进入光路；下面的环状光阑转盘，可视需要转动使用，把与物镜匹配的环孔旋入光路，使之处于转盘聚光镜下。 3．把绿色滤色镜放入镜座的滤色镜架上。转盘聚光器调换安装后，要进行合轴调中，使聚光器的光轴与显微镜的主光轴合一。其步聚如下：（1）把转盘聚光器的环状光阑调至“0”位，明视场照明的普通可变光阑进入光路。（2）旋转聚光器升降螺旋，聚光器升至最高位。（3）接通照明光源，使视场明亮。（4）把被检样品放到载物台上，用低倍（4×）物镜聚焦。（5）缩小镜座上的视场光阑开孔，至最小。（6）从目镜观察，在暗视场中可见一缩小的、明亮的、多角形的视场光阑图像。（7）转动转盘聚光器的两个调中杆，推动聚光器，把视场中的明亮的多角形的视场光阑图像，调至视场中央。（8）开放视场光阑至视场同大，视两者周边是否完全重合；否则，复用调中螺杆，使聚光器精神调中。

偏光显微镜结构图片

技术支持

正置偏光显微镜的安装
1、 显微镜的结构如图所示：
 

2、透射接头：将透射接头装上镜身，当止紧螺钉对准接头上的定位槽时，再将其止紧固定。
3、双目镜筒：将双目镜筒装在透射接头上，并用止紧螺钉止紧。
4、目镜：将目镜插入目镜筒内。
5、物镜：将载物台下降，4个物镜依次旋入转换器上，并务必旋紧到位。
6、聚光镜：检查聚光镜支架上的定位螺钉应定位于聚光镜底座上的定位槽内。
7、补色器：根据需要，将补色器插入补色器插口内。
8、滤色片：滤色片根据需要直接置于集光镜上。
9、移动尺：将移动尺安装在载物台上。
10、调节手柄：
需要调节物镜中心时，将调节手柄套入转换器上调节螺钉即可调节物镜中心。

相差显微镜的光路与成像

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   相差显微镜的照明光束，由转盘聚集器环状光阑的环状孔射入聚光镜，透射载物台上的被检样品，经样品后，入射光除透射的直线光外，同时产生衍射光。衍射光的振幅较小，相位滞后。直射光和衍射光进入物镜，前者由环状的共轭面、后者由较大的补偿面透过相板，前相互干涉造像。样品的影像由直射光（S）和衍射光（D）经干涉后的合成波（P）造成，即P=S±D；背景仅由直射光形成。由于直射光和衍射光两种光波的相位差异不同造成不同的反差效果，或明反差或暗反差不等视所用物镜的相板类别而定。成像光束由物镜射入目镜，在目镜的视场光阑处再次放大，并由出射光瞳射出目镜。

生物显微镜使用中常见的问题及解决办法

常见问题

以下列出了生物显微镜使用中常见的问题及解决办法，如您使用上述方法仍无法排除故障，请与我们联系

工业显微镜原理

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显微镜的日常维护与保养

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使用注意事项

使用之前，请详细阅读使用说明书，熟悉显微镜各部件功能，严格按操作步骤执行。

不要随意取下目镜和物镜，以防止尘土落进目镜筒和物镜内部；也不要任意拆卸各种部件，以免损坏。

显微镜属于精密仪器，不要随意搬动，避免震动。

每次使用完油镜之后，用镜头纸和清洁液（乙醚：无水乙醇＝7：3）清洗物镜。

显微镜每次使用完之后，请将光亮度调节旋钮置于最小位置，避免下次开启时烧坏灯泡。

显微镜的使用环境应保持清洁、干燥、防尘，避免光路系统长霉，影响观察。

维护保养

清洁用品

a.清洗液(乙醚：无水乙醇＝7：3)

b.吹气球(皮老虎)

c.镜头纸

d.木棒

擦拭方法

a.在擦拭各光学表面之前，先清洗整台显微镜，再用吹气球除去表面的尘粒，避免擦拭时刮伤光学表面。

b.根据不同大小的光学表面，决定用手或木棒擦拭（参考下图）。

c.擦拭镜头和滤光片的基本操作是从中央部位擦起，逆时针方向旋转，逐步向边缘擦拭。

擦拭部位

清洁显微镜表面及载物台，再清洗各光学部位
① 视场透镜 ② 聚光镜 ③ 物镜 ④ 目镜

生物显微镜原理

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生物显微镜原理示意图

使用无限远光学系统的显微镜主要由物镜、管镜和目镜组成。标本经物镜和管镜放大后，形成放大倒立的实象；实象经目镜再次放大后，形成放大的虚象。
标本（AB）在物镜（Lo）焦点上，通过物镜（Lo）和管镜（Le）在象方形成放大倒立的实象（A’B’）；靠近人眼一方的目镜（Le）对中间象（A’B’）再次放大，在明视距离（对人眼来说约为250mm）处形成一个虚象(A”B”)。
人眼通过显微镜所观察到的象就是一个被放大了的虚象A”B”。

如何清理显微镜

常见问题

擦拭工具:

用脱脂棉或者擦镜纸拭擦，不管用哪种，都要浸湿（专门的擦拭溶液），再擦，擦之前最好先用吹气球，装镜头表面的大颗粒吹掉。

擦拭液体/溶液:

配比酒精和乙醚的混合液，用脱脂棉擦。
7份乙醚3分无水酒精擦
乙醚如果没有的话那就直接买二甲苯擦

擦拭方法:

可以用无水酒精最好有乙醚（乙醚有毒）

然后用脱脂长绒棉以物镜中心绕圆往外擦

然后再用干的擦一次

然后用无尘吹气球，千万不能用皮老虎 那里面出来的空气 灰尘太大 白擦

30%的乙醚+70%无水乙醇，先吹气球，装镜头表面的大颗粒吹掉，再用干净的脱脂棉浸泡调和好的溶液在镜头上擦拭