上海光学仪器厂

显微镜鉴定纤维

服务支持

借助显微镜观察纤维纵向外形和截面形状，或配合染色等方法，可以比较正确地区分天然纤维和化纤纤维。天然纤维中棉，毛，麻，丝的纵横截面，具有不同的特征。在显微镜中观察纵向外形，即能区别大类。如果配合进行切片，就能分清大类总的具体纤维名称。例如，麻类纤维种类很多，纵向观察具有横节竖纹的特征，经过切片后，就可从横截面形态不同，羊毛总的粗毛和细毛的横截面形态亦不相同。化学纤维中的粘胶，醋脂类纤维的断面特征，也可以与其它纤维相区别。但截面呈椭圆形的化学纤维，如富强纤维，涤纶，腈纶等。

在显微镜中就无法确切区别，只能借助其他方法进行鉴别。由于化学纤维的飞速发展，异形纤维种类繁多，在显微镜观察中必须特别注意，以防混淆。例如；蚕丝横截面呈三角形，但异形纤维也能做出三角形。所以利用显微镜对纤维进行初步鉴别后，还必须进一步验证。复合纤维，混抽纤维等，由于纤维中具有两种以上不同的成分或组成，利用显微镜观察，配合进行切片和染色等，可以先确定是双组分，多组分或混抽纤维，再用其他方法进一步鉴别。

鉴别纤维的方法有显微镜观察法、燃烧法、溶解法、药品着色法、熔点法、密度法及双折射法等。此外，也可以根据纤维分子结构鉴别纤维，如X射线衍射法及红外线吸收光谱法等。

根据纤维的纵面、截面形态特征来识别纤维

（1）棉纤维：横截面形态：腰圆形，有中腰；纵面形态：扁平带状，有天然转曲。

（2）麻（苎麻、亚麻、黄麻）纤维：横截面形态：腰圆形或多角形，有中腔；纵面形态：有横节，竖纹。

（3）羊毛纤维：横截面形态：圆形或近似圆形，有些有毛髓；纵面形态：表面有鳞片。

（4）兔毛纤维：横截面形态：哑铃型，有毛髓；纵面形态：表面有鳞片。

（5）桑蚕丝纤维：横截面形态：不规则三角形；纵面形态：光滑平直，纵向有条纹。

（6）普通粘纤：横截面形态：锯齿形，皮芯结构；纵面形态：纵向有沟槽。

（7）富强纤维：横截面形态：较少齿形，或圆形，椭圆形；纵面形态：表面平滑。

（8）醋酯纤维：横截面形态：三叶形或不规则锯齿形；纵面形态：表面有纵向条纹。

（9）腈纶纤维：横截面形态：圆形，哑铃形或叶状；纵面形态：表面平滑或有条纹。

（10）氯纶纤维：横截面形态：接近圆形；纵面形态：表面平滑。

（11）氨纶纤维：横截面形态：不规则形状，有圆形，土豆形；纵面形态：表面暗深，呈不清晰骨形条纹。

（12）涤纶、锦纶、丙纶纤维：横截面形态：圆形或异形；纵面形态：平滑。

（13）维纶纤维：横截面形态：腰圆形，皮芯结构；纵面形态：1~2根沟槽。

生物显微镜链接  http://www.shoif.com/old_version/life/zhengzhishengwu/

倒置荧光显微镜及其主要应用领域

技术支持, 未分类

倒置显微镜具有在培养瓶或培养皿内进行显微观察的特点,可以观察不经染色的透明活体 ; 落射荧光显微适用于荧光显微术。该仪器特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究，是生物学，细胞学，肿瘤学，遗传学，免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研、高校、医疗、防疫和农牧等部门使用。倒置荧光显微镜是由倒置显微镜和落射荧光显微镜组成。仪器配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜、双目观察，倒置显微镜还配有特长或超长工作距离聚光镜，同时配有相衬装置及长工作距离平场相衬物镜。

倒置荧光显微镜是近代发展起来的新式荧光显微镜，特点是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片/双色束分离器/阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。

倒置荧光显微镜由荧光附件与倒置显微镜有机结合构成的，主要用于细胞等活体组织的荧光、相差观察。 倒置显微镜(Inverted microscope)是为了适应生物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验等显微观察。由于这些活体被检物体均放置在培养皿(或培养瓶)中，这样就要求倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长，能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因此，物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来，故称为”倒置显微镜”。倒置显微镜多用于无色透明的活体观察，在倒置显微镜的基础上添加一套荧光附件：激光激发块，荧光光源，荧光照明器，激发块切换装置，即可进行倒置荧光观察。

一、荧光显微镜标本制作要求

1.载玻片

载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。

2.盖玻片

盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涩盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光可激发标本。

3.标本

组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不能被充分激发。另外，细胞重叠或杂质掩盖，影响判断。

4.封裱剂

封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在PH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/L PH9.0～9.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。

5.镜油

一般用暗视野荧光显微镜和油镜观察标本时，必须使用镜油。最好使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。

二、荧光显微镜基本操作

1.关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯;

2.根据样品标记的荧光素选择相应的滤光片;

3.放好样品，找到合适的视野;

4.如需拍照，请确认照相机内已装好彩色胶卷(最好使用27定胶卷);

5.开启自拍装置，选择手动档，通常拍摄速度在0.5-10秒内;

6.使用结束，关闭所有电源并做好使用记录。

三、荧光图像的记录方法

荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上可靠的。随着技术科学的发展，在不同程度上采用客观指标记录判断结果，如用细胞分光光度计，图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果，也必须结合主观的判断。

荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要，由于荧光很易褪色减弱，要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。只是需要采用高速感光胶片即可。因紫外光对荧光猝灭作用大，如FITC的标记物，在紫外光下照射30s，荧光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。

四、使用荧光显微镜的注意事项

1.严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。

2.应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。

3.防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。

4.检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱;标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱;所以，最多不得超过2～3h。

5.荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。

6.标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。

7.荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“-”指无或可见微弱荧光。“+”指仅能见明确可见的荧光。“++”指可见有明亮的荧光。“+++”指可见耀眼的荧光。

生物显微镜的使用及维护

常见问题

1．生物显微镜的结构光学显微镜由机械支持及调节系统和光学放大系统组成(图3)。

(1)机械系统部件，生物显微镜的机械部件是整个显微镜的骨架，它是安装光学放大系统的基座。显微镜的机械部件包括镜座、镜劈、镜筒、旋转盘、调节器、载物台、推进器、聚光器、光圈、电源调节等。

(2)光学放大系统部件生物显微镜的光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源等。

2．显微镜的使用方法及注意事项显微镜结构精密，使用时必须细心，要按下列步骤进行。

(1)准备用右手紧握镜臀，左手托着镜座，乎稳地将生物显微镜放到实验台上，在身体前方偏左的位置，距桌绦10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸。

(2)调节光源先将电流调节器族至最小，插上电源，打开电源开关，旋转调节器使亮度由弱到强．至适合观察。

(3)低倍镜观察定位低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置。将标本放置在裁物台上，移动推进器，使披观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节螺旋，使物镜至标本o5mm处，调节聚光器使光线变弱，目镜观察并同时用粗调节螺旋慢慢升起载物台．直至视野出现*再用细调节螺旋使视野清晰为止。将其移到视野中央。

(4)高倍镜观察，在低倍镜观察定位的基础上转换高倍物镜，在转换物镜时要避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调整光亮适应，缓慢调节粗调节螺旋使载物台上升，直至物像出现，再用纫调节螺旋调至物像清晰，移动至视野中心进行观察或准备用袖镜观察。

(5)油镜观察，油镜的放大倍数为删倍，只有在此状态下，才能较好地观察细菌。使用泊镜需要加香柏油，这是由于油镜的透镜很小，光线自标本片透过进入空气中时，因介质密度不同，部分光线因折射不能进入透镜，视野亮度不够、物像不清。在标本片和泊镜之间加与玻璃折光串(n=1.52)相近的香柏油(n＝1．535)，避免了光线的折射与反射，视野的亮度增强，提高了分辨率。油浸物镜的工作距离(指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离)在o．2㎜以内，故而使用油镜时要特别细心，避免调焦不慎压碎标本片．也使物镜受损。必须按下列步骤操作。

①在标本片上镜检部位滴上香柏油1滴，置载物台中央。

②调节粗螺旋，位载物台上升，使油镜头浸入香柏油中．此时镜头几乎与标本接触。

③从目镜观察，放大光圈或调节电流，使亮度合适。慢慢调节粗螺旋使裁物台上升，出现物像运用细螺旋(只允许在180°范围内调节)调至物像最清晰为止。若袖镜头己离开油面而仍束见到物像，须重复上述操作直至物像最清晰。

④观察完毕，降下载物台，转动旋转盘，使袖镜偏位，先用撩镜纸擦去镜

头上的香柏油，再用探镜纸蘸少许二甲苯，擦去镜头上残留的油迹，最后再用

擦镜纸拭去二甲苯。

⑤将各部件还原，关闭电源。

镜头。将生物显微镜放回拒内或箱内

我公司正置生物显微镜：http://www.shoif.com/old_version/life/zhengzhishengwu/
3.显微镜的维护

(1)生物显微镜是贵重精密仪器，使用时要认真、爱惜，切勿拆散玩弄。

(2)保持显微镜清洁，使用前后均应以软布擦拭各部件。各光学镜头用擦镜纸拭之。油浸镜用后，立即用棕镜纸循一个方向将油据去．千万不可让镜油干结镜头导致透镜模糊不清。

(3)应避免强光直接照射显微镜，注意不使酸、碱、氯仿等接触机件。

(4)若长时间不用显微镜，在镜外加盖塑料防尘罩后放入镜箱或显微镜柜，并保持环境干燥、阴凉通风。

普通光学显微镜的使用方法和注意事项

技术支持

1．低倍镜的使用方法

（1）取镜和放置：显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2寸为宜，便于坐着操作。

（2）对光：用拇指和中指移动旋转器(切忌手持物镜移动)，使低倍镜对准镜台的通光孔(当转动听到碰叩声时，说明物镜光轴已对准镜筒中心)。打开光圈，上升集光器，并将反光镜转向光源，以左眼在目镜上观察(右眼睁开),同时调节反光镜方向，直到视野内的光线均匀明亮为止。

（3）放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位调到通光孔的正中

（4）调节焦距：以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注意在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。然后，两眼同时睁开，用左眼在目镜上观察，左手顺时针方向缓慢转动粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。

如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心(注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的)。如果视野内的亮度不合适，可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节，如果在调节焦距时，镜台下降已超过工作距离(>5.40mm)而未见到物象，说明此次操作失败，则应重新操作，切不可心急而盲目地上升镜台

2．高倍镜的使用方法

（1）选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高倍镜的观察。

（2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片)，如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。

（3）调节焦距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动约0.5－1圈，即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!)

如果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时，必须顺时针(切勿转错方向)转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。

3．油镜的使用方法

（1）在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。

（2）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。

（3）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。

（4）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。

如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。

（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。

注意事项

• 持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。
• 轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。
• 保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。
• 水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。
• 放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。
• 要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图。
• 不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。
• 使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后填写使用登记表。(注：反光镜通常应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台下降时会碰坏光圈，所以这里改为平放)

操作显微镜必须知道的六个常识

常见问题

一 显微镜聚光镜位置中心校正步骤

1. 标本放置载物台上，旋转10倍物镜对焦，调整至最清晰状态。

2. 缩小视野光圈至使他佔满视野的70%~80%，调整聚光镜升降，直到视野光圈线条清晰为止，将光圈内切圆，若无内切圆请调整至内切圆。

3. 打开视野光圈佔满整个圆，即完成调整步骤。

二 双眼显微镜的观察调节

1. 先对焦右眼，再调整左眼视差补偿至右眼清晰度相同。

2. 调整两眼的眼幅，双眼一起观察至中间不会有隔开的感觉。

三 显微镜调焦方法

显微镜对焦时，先使用高倍率，在使用低倍率，高倍往低倍对焦，如此才能形成共焦，在调整倍率的时候，只需做小幅度的微调即可。

四 显微镜聚光镜孔径

孔径开大时，景深浅，对比低，解析度高

孔径开小时，景深长，对比高，解析度低

五 专业术语解答

B.F：bright field(明视野)看染色标本

D.F：dark field(暗视野)看透明未染色标本

Phase contrast(位相差)：看未染色透明细胞

Fluorescence(萤光)：看染萤光染剂的标本或自发萤光的标本

Dic(干涉相位差)：看透明未染色标本的表面，使他有立体感，有如浮凋的画面

偏光：看结晶体及矿石标本

六 聚光镜的种类

DRY(40倍以下不需滴油)

OIL式聚光镜(任何倍率都需要滴油)

DIC配件：物镜必须为DIC专用物镜，聚光镜必须为DIC专用聚光镜

必须有DIC稜镜移动插槽，上偏光镜，下偏光镜

复式显微镜的操作

技术支持

复式显微镜一般为单眼观察(比较高级的也有双眼同时观察)，放大倍率较解剖显微镜高很多，甚至于千倍。为研究生物学一项不可或缺的工具。

复式显微镜的原理

复式显微镜的镜头都是采用凸透镜来制造，所以有放大功能；放大倍率是目镜和物镜的乘积。因为光线来源是穿透式的，所以观察的材料要切的薄薄的，让光线穿过，才能进行观察，因此，通常我们必须要先将观察的材料做成切片标本。

 
制作标本的工具

盖玻片

载玻片

滴管

镊子

培养皿

刀片

新鲜标本的制作  (以头发为例)

(1) 取干净的载玻片一片

(2) 滴一滴水(不要太多！)

(3) 梳梳头发，在梳子上找一根掉发。

(4) 将头发放在水滴中央。

(5)盖玻片以45°慢慢盖上，避免产生太多气泡，影响观察。

(6) 如果发现盖玻片会浮动，就是水滴太多了，这时拿一张吸水纸靠在盖玻片旁边，将多余的水分吸掉。

(7) 如果气泡太多影响观察，或者是水太少，可以在盖玻片的一侧滴一滴水，在另一侧放吸水纸将水均匀的吸过去。

(8) 做好的标本若要暂时保存，则可以用指甲油将盖玻片的周围封起来。

新鲜标本的观察

1.把做好的玻片标本放在显微镜镜台的中央，中心点对准镜台中央的圆孔。

2.把玻片两端用玻片夹夹住固定。

3.物镜放入10x，旋转旋转盘，调整为最低倍的物镜(通常是4x)，此时放大倍率是40x。

4.光源：

(a)打开显微镜自己的灯源(若没灯源则调整反光镜的位置)

(b)调整光圈的大小，使光线适中。

(c)若是在高倍率下，可以外加灯照。

5.转动粗调节轮，直到玻片距离物镜约1㎝左右，转动细调节轮，直到看得清楚。

6.练习两眼同时张开，以左眼观察(这样右手可直接画图记录，所以若你是惯用左手，就用右眼观察)

7.在低倍镜下找到要观察的东西后，将要观察的东西移至视野中央。

8.更换高倍物镜观察，稍稍转动细调节轮，使视野清楚，如果换成高倍物镜就看不到所要观察的东西，则换回低倍镜下确定所观察的东西在视野中央。

9.光线太暗的处理：

(a)检查显微镜的灯源有没有开(或是反光镜有没有调好)

(b)光圈的大小

(c)标本是不是切得太厚不透光。

10.头发观察的结果：

标本的染色

1.生物的细胞通常是透明无色的，所以加入染色剂可以让我们观察的更清楚。

2. 常使用的染色剂是碘液和甲基蓝液。

3. 方法一：直接滴加一滴染色剂替代水。

4. 方法二：已做好的标本，则可以在盖玻片的一侧滴一滴染色剂，在另一侧放吸水纸将水均匀的吸过去。

金相材料分析与制样过程

技术支持, 未分类

          用金相显微镜如何观察不同金属组织及缺陷呢，以下这个详细制做过种是初学者们最好的学习参考。

一、 实验的主要目的
1.初步学会金相样品制备的基本方法
2.分析样品制备缺陷及防止措施
3.初步认识金相显微镜下的组织特征
4.学习数码照相技术

二、实验概述

   在要检测的材料或零件上截取样品，取样部位和磨面根据分析要求而定，截取方法视材料硬度选择，尺寸以适宜手握为宜。

最常用的取样方法

  粗磨

检验面整平

倒角

粗砂纸磨制

细磨
在一套不同粒度的砂纸上磨制，由粗到细。

更换砂纸时，磨痕方向与上道垂直，砂粒勿带入下道。

磨向要长、用力匀，样品与砂纸紧密接触

抛光：电解抛光、化学抛光、机械抛光、复合抛光等

抛光材料
抛光粉

抛光布

抛光液、抛光膏等

抛光机使用方法与注意事项
1.开机前，检查并放好抛光布，压布圈、环形盖。
2.按抛光机开关面版上的指示方向，打开开关或按钮，
 抛光盘转动平稳后进行抛光
3.抛光时，头要抬高，以防样品飞出伤人。
4.注意安全。

抛光方法

选择抛光粉
配制抛光溶液，比例大约为10—15%。
打开抛光机开关或按钮，
手握紧样品放在盘半径约一般处抛光。
边抛光边加入少量的抛光液。
注意若抛光液浓度不均匀，振动瓶子，数秒后加入。
一般的材料用Cr203绿粉、帆布粗抛光即可。
特殊样品要用Fe2O3红粉、丝绒细抛光。
样品表面抛好后，光亮如镜，干净干燥可腐蚀。
       否则重抛光或用水冲洗，用酒精冲洗，吹干腐蚀

 
其它磨抛设备
粗磨、细磨、抛光在预磨机、磨抛机上进行。  

预磨机

带具磨抛机

腐蚀：
化学腐蚀
电解腐蚀
恒电位腐蚀等

最常用的为化学腐蚀方法

常用化学腐蚀方法

化学侵蚀操作

腐蚀剂的配制方法

常用腐蚀剂

样品制备过程注意事项

样品制备缺陷

。

怎样用间接法进行免疫荧光细胞化学染色

技术支持

 以下是具体的实验操作步骤：
（1）切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液体。
（2）再滴加间接荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体等），同上步骤，染色30min，37℃，缓冲盐水洗两次10min，搅拌，缓冲甘油封固，镜检。
对照染色：
①抗体对照：用正常兔血清或人血清代替免疫血清，再用上法进行染色，结果应为阴性。
②抗原对照：即类属抗原染色，亦应为阴性。
③阳性对照。
  间接法中上述方法称双层法（Double Layer Method）。另一种称夹心法，即用未标记的特异性抗原加在切片上先与组织中之相应抗体结合，再用该抗原之荧光抗体重叠结合其上，而间接地显示出组织和细胞中抗体的存在，方法步骤如下：
①切片或涂片固定后，置于染色湿盒内。
②滴加未标记的特异性抗原作用切片于37℃，30min。
③缓冲盐水洗2次，每次5min，吹干。
④滴加特异性荧光抗体再用切片于37℃，30min。
⑤如③水洗。
⑥缓冲甘油封固，镜检。
　间接法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原，敏感性较高，操作方法较易掌握，而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体（如麻疹）等的研究和检查，所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。

金相检验常用检验标准

技术支持

金相检验有多种方法分别为：

• 金属显微组织检验方法（GB/T 13298-1991）
• 钢中非金属夹杂物含量的测定标准评级图显微检验法GB/T 10561-2005,
• 金属平均晶粒度测定方法GB/T 6394-2002,
• 低碳冷轧钢板铁素体晶粒度测定方法GB/T 4335-84,
• 钢的显微组织评定方法GB/T 13299-1991,
• 钢的脱碳层深度测定法（GB/T 224-1987）
• 钢中石墨显微评定方法（GB/T 13302-1991）
• 高碳钢盘条索氏体含量金相检测方法YB/T169-2000
• 钢的低倍组织及缺陷酸蚀检验法（GB/T 226-1991）
• 钢的硫印检验方法（GB/T 4236-1984）
• 钢材的断口检验法（GB/T 1814-1979）
• 钢材塔形发纹酸浸检验方法（GB/T 15711-1995）
• 结构钢低倍组织缺陷评级图（GB/T 1979-2001）
• 连铸钢板坯低倍组织缺陷评级图，YB/T4003-97
• 优质碳素结构钢和合金结构钢连铸坯低倍组织缺陷评级图YB/T153-99
后面我们会详细讲解每种方法。